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上海莼试生物技术有限公司
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磷脂酶D（PLD）测试盒操作流程描叙
2021-8-31 阅读(366)
磷脂酶D(PLD)测试盒操作流程描叙：
1、将要进行实验的版孔进行设定好，标准品 5 个点，每个点设定平行，需要用到 10 个孔，空白只需 1 个孔。剩下孔可以做为样本孔
2、 稀释标准，准备好 5 个 EP 管，然后在每个 EP 管中加入 150 微升标准稀释液，编上编码，分别为 1，2，3，4,5，在 1 号管中加入 150 标准品，用枪头反复吹打 10 次左右（注意控制幅度不要过大容易产生气泡）如果有涡旋仪可以在涡旋仪上涡旋 5 秒左右，然后换枪头，在 1 号管中取 150 微升加入到 2 号管，后面过程一次类推。最后稀释完，前面 4 个管中每管液体在 150 微升，5 号管为 300 微升。浓度是从大到小。
3、 标准、样本、空白加样：标准是每个浓度点 2 个孔（做平行），每孔加入 50 微升，加样过程中注意换枪头，样本孔中每孔加入 50 微升，加样过程中注意换枪头，空白孔加入 50 微升标准稀释液或者样本稀释液。特别要说明的是，标准加样和样本加样尽量控制在 15 分钟内加完，如果时间拖的太长，会导致前面孔先反应后面孔才开始反应，这样数值偏差过大。加完样后盖上封板膜，至 37 摄氏度孵育 30 分钟.
4、洗版，在孵育过程中可以将洗涤液配好，20 ml30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水或者去离子水定容到 600 ml 即可。每孔加入 250-300 微升的洗涤液（不要漫过版孔），（如果有震荡仪的话，可以讲板子放入震荡仪上 5 秒左右，然后静止三十秒，没有请忽略次过程）将板子在桌子上晃动 5 秒左右，然后静置 30 秒，甩干，拍板。说明：甩干过程尽量要快，1 秒内就可以完成，不要慢慢倾斜倒掉液体，直接翻板甩掉液体即可。拍板过程需要在桌子上垫一层吸水纸或者滤纸，版孔朝下拍几下，拍干区别主要看吸水纸和滤纸上没有明显的水渍为完成。
5、每孔加入 50 微升的酶标试剂，此处在空白孔中不需要加（空白孔为空），孵育 30 分钟。
6、 洗版同步骤 4
7、显色，先每孔中加入 50 微升的显色 A 液，然后每孔中加入 50 微升显色 B 液。避光 37 摄氏度显色 15 分钟
8、终止，每孔加入 50 微升的终止液，注意，加完终止液必须在 15 分钟内读数，超过时间读数无效。在规定时间内读数都是有效的。
9、至此，整个实验结束。
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