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. MRM 技术在生物标志物检测中的应用运用蛋白组学的方法进行生物标志物的发现和检测是目前蛋白质组研究的热点。随着蛋白质组学技术的发展,采用二维凝胶电泳或枪法(shotgun)技术寻找上调或下调蛋白质以发现生物标志物的研究策略已得到很大的丰富和完善。目前,标志物发现- 验证- 临床确证的研究模式已得到研究者们的广泛认可[5,6]。桂林市药物结构确认及杂质分析-CMA资质
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MRM 技术在生物标志物检测中的应用运用蛋白组学的方法进行生物标志物的发现和检测是目前蛋白质组研究的热点。随着蛋白质组学技术的发展,采用二维凝胶电泳或枪法(shotgun)技术寻找上调或下调蛋白质以发现生物标志物的研究策略已得到很大的丰富和完善。目前,标志物发现- 验证- 临床确证的研究模式已得到研究者们的广泛认可[5,6]。即在发现阶段从疾病组织中寻找与正常组织有差异的蛋白质,到验证阶段使用M R M 技术于组织周边体液或血浆中检测该差异蛋白质,利用子离子谱进行定性,后用M R M 技术和同位素稀释或质量标签标记(mTRAQ)的方法对筛选出来的标记物定量,进行临床确证。这种研究模式使体液中生物标志物的发现和验证更为有效、科学和合理。MRM 技术与金标准ELISA 相比,周期更短、成本更低,更重要的是能进行与同一疾病相关的多个标记物同时测定且不需制备其相应的抗体,具有*的应用*性。M R M 技术在验证和确证阶段都有极其重要的应用,充分体现了该技术在生物标志物检测领域的价值。例如,在Whiteaker 等[7]的研究中,以小鼠为模型研究乳腺癌的生物标志物;用液相色谱串连质谱(LC-MS/MS)对肿瘤和正常乳房组织的蛋白质进行检测,筛查出700 个以上差异蛋白质;再联合抗体和MRM 技术后鉴定了fubulin-2 作为血浆中的生物标志物。实验结果进一步验证了M R M 技术验证生物标志物的方法,在发现新型生物标志物研究中的可行性。Kuhn 等研究[8]表明,MRM 技术与同位素标记相结合进行定量分析,可以节省分析时间,并且能得到与抗体和免疫分析等经典验证方法具良好相关性的检测结果。他们采用同位素标记合成肽段和MRM 技术相结合,检测来自类风湿性关节炎患者血浆样本中诊断标记物C- 反应蛋白的浓度,并对方法的回收率、线性等进行了考察,结果能达到高达66%的回收率和3 个数量级以上的线性范围。
二、IR(红外)测试
仪器:北京瑞丽光谱仪器公司 WQF-520A傅里叶变换红外光谱仪
测试条件:KBr压片法
测试结果:各个样品的吸收峰等列表如下:
吸收峰cm-1 | 基团 | 强度 |
(药品结构分析)样品 批号:B20151001 | ||
3444 | -OH | S |
3218、3149 | N-H | M |
2971、2939 | C-H | M |
1450、1371 | CH3、CH2 | M |
1621 | CH3CH2OCOO- | S |
解析:1、3444cm-1,为结晶水-OH伸缩振动吸收峰,属强吸收峰
2、3218、3149cm-1,为伯胺N-H伸缩振动吸收峰,属中等强度吸收峰;
3、2971、2939 cm-1,为甲基、亚甲基C-H伸缩振动吸收峰,属中等强度吸收峰;
4、1450 、1371cm-1,为甲基、环烷烃CH2变形振动吸收峰,属中等强度吸收峰;
5、1621 cm-1,为乳酸络合成盐振动吸收峰,属强吸收峰;
可见,样品(批号为:B20151001)的红外光谱图的特征吸收峰符合(药品结构分析)的特征官能团的吸收峰。
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