氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)-100T-南京亿迅生物科技有限公司

氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)，其吸收峰在波长570nm处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比，该试剂盒主要用于检测植物组织、血清、尿液、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。

实验流程:

1、准备样品

①植物样品：取新鲜植物组织，称取0.4g，按植物组织：AA Lysis buffer(1×)=0.4g：2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)匀浆或研磨，用无氨蒸馏水稀释至40ml，混匀，

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer(1×)进行匀浆，1000g离心5min，留取上清即为氨基酸粗提液

④高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer(1×)进行恰当的稀释。

2、配制茚三酮显色液: 取0.3g茚三酮，溶解于50ml茚三酮稀释液，搅拌或超声处理至完全溶解，即为茚三酮显色液。

3、配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AA Assay buffer，按茚三酮显色液：AA Assay buffer=35：3的比例混合，即为茚三酮工作液

4、配制维生-素C工作液: 取出1支维生-素C，准确溶解于30ml无氨蒸馏水，混匀

5、配制系列氨基酸标准溶液：取出氨基酸标准(50μg/ml)恢复至室温，用无氨蒸馏水将其稀释至10μg/ml，然后按下表继续稀释：

加入物(ml)	1	2	3	4	5
氨基酸标准(10μg/ml)	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
无氨蒸馏水	0.4	0.3	0.2	0.1	0
氨基酸浓度(μg/ml)	2	4	6	8	10

6、AA加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入

加入物(ml)	空白管	标准管	测定管
无氨蒸馏水	0.30	—	—
系列氨基酸标准(1~5号管)	—	0.30	—
待测样品	—	—	0.30
茚三酮工作液	0.45	0.45	0.45
维生-素C工作液	0.15	0.15	0.15
混匀，80℃中加热20min，冰水迅速冷却。

7、AA测定：加60%乙醇2.1ml，混匀；立即以空白调零，分光光度计(比色杯光径1cm)测定标准管、测定管570nm处吸光度(记为A标准、A测定)。

氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)-100T

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