南京沃博生物科技有限公司

多抗 Protein A 纯化具体步骤

时间:2023-6-20阅读:1081

实验试剂:

100mM ganansuan pH 2.5,1 M Tris-HCl pH 9.0,20 mM 磷酸钠溶液(pH 7.0)、灭菌二级水、1×PBS、20% 乙醇

实验步骤:

1.将血清进行离心,10000rpm、4℃离心 5 分钟(两遍),将上清取出放入干净的 50 ml 离心管,丢弃沉淀。

2.从冰箱取出 ProA 柱,室温放置几分钟。然后用 5 倍柱体积的二级水过柱,再用相同体积的 20mM 的磷酸钠溶液(PH7.0)平衡柱子。

3.将离心好的上清过 ProA 柱。

4.待血清(余约 20ml)过柱完毕,用 10 倍柱体积的 20mM 的磷酸钠溶液(PH7.0)洗柱

5.在 15ml 收集管中预先加入 0.2 倍柱体积即 0.4ml 的 1M Tris-Hcl(PH9.0),然后用 4 倍柱体积即 8ml 的 100mM 的ganansuan(PH2.5)洗脱柱子,并收集洗脱液

6.洗脱完毕,立即颠倒管子,将洗脱液与中和液混匀

对柱子的处理是:先用 3 倍柱体积的 100mM ganansuan(PH2.5)洗柱子,然后依次用 5倍柱体积的 20mM 的磷酸钠溶液、5 倍柱体积的灭菌二级水、2 倍柱体积的 20%乙醇冲洗柱子,冲洗完毕后,再加入 2 倍柱体积的 20%的乙醇,盖紧底帽,4 度保存柱子。



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