纯化步骤：

1. 腹水离心：12000 rpm、离心 6 分钟，用 1ml 移液枪将上清小心吸出（注意避免吸到沉淀和表面油状漂浮物）。

2. 往离心好的腹水里加入 20mM pH7.0 的磷酸钠进行稀释，补足至 4ml，颠倒 15ml 管 10次混合均匀。（稀释后若发现有沉淀需再次离心。）对于大于 6ml 样品，往离心好的腹水里加入等体积 20mM pH7.0 的磷酸钠进行稀释，颠倒 15ml 管 10 次混合均匀。

3. 在离心腹水的过程中，取出 protein G 柱，室温平衡 5 分钟，用 5 倍柱体积的灭菌二级水冲洗，然后用 20mM pH7.0 的磷酸钠 5 倍柱体积平衡 protein G 柱。

注意：在第一次用二级水冲洗的时候，用一根一次性吸管将每根柱子中的填料吹起混匀，以使每根柱子的流速尽量一致。

4. 待 20mM pH7.0 的磷酸钠流尽后，一次性吸管吸取离心稀释后的腹水小心加到 protein G柱子里，注意保持凝胶介质表面的平整。流穿收集到 15 ml 离心管里。

5. 20mM pH7.0 的磷酸钠 10 倍柱体积洗涤柱子。

6. 洗脱收集管准备：在洗涤柱子的同时，准备 2ml 离心管 2 个（第一根收 1.5ml 抗体，第二根收 1ml抗体），标记 ‘01/02’（01 代表第一根收 1.5ml 抗体的收集管，02 代表收 1ml 抗体的收集管）。并预先分别在 2 个收集管里加入 75/50ul 1M Tris-HCl pH 9.0 +180/120ul 抗体保护液。

抗体洗脱：

等 20mM pH7.0 的磷酸钠流尽后，加入 800ul 的 0.1M ganansuan溶液，不收集此 0.8 ml 洗脱液，再用 0.1M ganansuan溶液（pH 2.5）2.5ml 进行洗脱。（1.5ml+1ml）。

收集结束立刻上下颠倒 EP 管进行混匀，用 pH 试纸测试洗脱液是否为中性，然后将洗脱好的抗体放置于冰上。

对于腹水体积在 2-4ml 的样品，选择两个 1ml 填料柱子纯化。

若腹水体积 V，4ml＜V≤10ml,则选用 3ml 柱填料的大 PG 柱纯化，纯化方法和步骤与上述一致，洗脱时先加入 1.5ml 的 0.1M ganansuan溶液，不收集此 1.5 ml 洗脱液

在洗涤柱子的同时，准备 15ml 离心管，预先在每个洗脱液收集管里加入 300ul 1MTris-HCl pH 9.0 +660ul 抗体保护液。

用 6ml 的 0.1M ganansuan溶液（pH 2.5）洗脱，收集洗脱液。收集结束立刻上下颠倒 EP管进 行混匀，用 pH 试纸测试洗脱液是否为中性，然后将洗脱好的抗体放置于冰上。

5.3.9 洗脱完毕后，对柱子的处理是，再次往 Protein G 柱里加入 6 倍柱体积的 0.1M ganansuan溶液（pH 2.5）chedi洗脱柱子，等ganansuan溶液（pH 2.5）流尽，加入 20mM pH7.0 的磷 酸钠 5 倍柱体积清洗柱子。然后用去离子水 5 倍柱体积清洗柱子，接着用 20% 乙醇 2 倍柱体积清洗柱子，流尽后，柱子底端盖紧帽子，加入 2 倍柱体积 20%乙醇 4℃保存柱子。