丙二醛（MDA）是脂质过氧化作用的天然副产物，被广泛用作确定氧化应激和自由基形成的关键指标。MDA的测量在历*一直依赖于与硫代*酸（TBA）的反应，以产生可以比色法或比色法测量的化合物。但是该测定法并非特定于MDA，而且还可以在90-100°C的酸性条件下进行。已经有许多商业化的ELISA试剂盒，这使其更加昂贵和乏味。Amplite™比色丙二醛（MDA）定量试剂盒提供了快速，方便的方法来测量MDA，而无需使用TBARS加热步骤。MDA Blue™与MDA反应生成蓝色产物，该产物用酶标仪在695 nm下测量。

1. 准备测试样品以及系列稀释的MDA标准品（50 µL）

2. 添加MDA Blue™储备溶液（10 µL）

3. 在室温下孵育10-30分钟

4. 添加反应溶液（40 µL）

5. 在室温下孵育30-60分钟

6. 监测OD在695 nm处的增加

重要说明
开始实验前，请在室温下解冻所有组分。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. MDA标准溶液（100 mM）：
将100 µL ddH ₂ O加入MDA标准样品瓶（组分C）中，制成100 mM MDA储备溶液。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

向996 µL稀释缓冲液（组分B）中加入4 µL 100 mM MDA标准液，得到400 µM MDA溶液（MDA7）。然后在稀释缓冲液中进行1：2的系列稀释，以得到系列稀释的MDA标准品（MDA6-MDA1）。

程序

表1.  MDA标准品和测试样品在96孔透明底部微孔板中的布局。MDA = MDA标准品（MDA1-MDA7，6.25至400 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和2中提供的布局，准备MDA标准品（MDA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。
   

2. 在MDA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入10 µL MDA Blue™（组分A）溶液。对于384孔板，在每个孔中使用5 µL MDA Blue™溶液。
   

3. 将反应混合物在室温下孵育10-30分钟。
   

4. 加入40 µL反应溶液（组分D）使总测定体积为100 µL /孔。对于384孔板，请使用20 µL反应溶液，总测定体积为50 µL /孔。
   

5. 将zui终反应混合物在室温下孵育30-60分钟。
   

6. 使用吸光度板读数器监控吸光度，并在695〜700 nm的OD下进行路径检查校正。

数据分析

2.82.11.40.7400200- Formaldehyde- Glyceraldehyde- MDAData legendGenerated with Quest Graph™Aldehyde Concentration (uM)AbsHover mouse to interact

从空白标准孔获得的读数（Abs）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值即可得到基线校正值。然后，绘制标准读数，以获得标准曲线和方程式。该方程式可用于计算醛浓度样品。我们建议您使用在线线性回归计算器