产品信息

产品简介

ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为ER-Tracker Blue-White DPX，Ex= 374 nm，Em= 430-640 nm，蓝色荧光，属于DapoxylTM（DPX）家族成员之一。DPX系列染料均具有长发射波长、高吸光系数、高量子产量、较大斯托克司频移等特点。但这些染料具有环境敏感性，会随之出现极性增强、zui大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。

本品为溶于DMSO的1mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液，推荐工作浓度为100nM-1μM。

产品性质

分子式（Formula）：C26H21F5N4O4S

分子量（Molecular Weight）：580.53

外观（Appearance）：Yellow Solution

Ex/Em：374/430-640nm

滤片（Filter）：DAPI or UV longpass

步骤说明

本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其*使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。

1. 试剂准备

使用前将ER-Tracker Blue-White DPX 回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。

2.  细胞样品处理及染色

2.1 将1mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度100nM-1µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s （HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到*实验结果。

2.2 染色

对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。【注】：由于ER-Tracker Blue-White DPX探针具有较高光敏感性，会产生波动较大的发射吸收峰值，使用长通DAPI滤光片效果。 另，操作过程中需尽量避光。

细胞如需固定，请参考以下步骤。

3． 细胞固定及透化处理

3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞10-20min。

【注】：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Blue-White DPX留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

3.2 （可选）透化处理：若细胞还需进行后续染色，需对细胞利用0.2% TritonX-100 透化10min。

3.3 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2次。镜检即可。

注意事项

1）不能储存在无霜冰箱，建议按照单次用量分装于-20℃冻存。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃避光干燥保存，避免反复冻融，有效期6个月。

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