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| 激发（nm） | 发射（nm） |
| 571 | 584 |
我们的Amplite™Red是一种敏感的荧光过氧化物酶底物，可产生高度红色的荧光产物，zui大吸收量为571 nm，zui大发射量为585 nm。与其他HRP底物（例如二氢荧光素和二氢罗丹明）不同，Amplite™Red的空气氧化作用极小。Amplite™Red是用于检测HRP和H2O2的zui灵敏，稳定的荧光探针之一。在许多免疫测定中，Amplite™Red已被广泛用于检测HRP。另一方面，Amplite™Red也可以用于检测痕量的H2O2。基于Amplite™Red的H2O2检测灵敏度比常用的大麦草碱H2O2检测灵敏度高至少一个数量级。由于H2O2是在许多酶促氧化还原反应中产生的，
平台
| 荧光酶标仪 | |
| 激发 | 540纳米 |
| 发射 | 590纳米 |
| 隔断 | 550纳米 |
| 推荐板 | 纯黑色 |
带有Amplite TM Red的过氧化物酶（HRP）的方案摘要（用于一个96孔黑色板）
准备并添加1X Amplite TM Red工作溶液和200 mM H 2 O 2的磷酸盐缓冲液（50 µL）
加入过氧化物酶标准品或测试样品（50 µL）
在室温下孵育10-30分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
重要说明
以下是溶液中过氧化物酶测定的推荐方案。该协议仅提供指南，应根据具体需要进行修改。
开始实验前，在室温下解冻每种试剂盒成分之一。
带有Amplite TM Red的H 2 O 2的协议摘要（用于一个96孔黑色平板）
用磷酸盐缓冲液（50 µL）中的0.4 U / mL过氧化物酶制备1X Amplite TM Red H 2 O 2工作溶液
加入过氧化物酶标准品或测试样品（50 µL）
在室温下孵育10-30分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
重要说明
以下是溶液中H 2 O 2分析的推荐方案。该协议仅提供指南，应根据具体需要进行修改。
开始实验前，在室温下解冻每种试剂盒成分之一。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
Amplite TM Red储备液（250X）：
将200 mL无水DMSO加入小瓶中，充分混合。储备溶液应及时使用。任何未使用的溶液都应等分并在< -20 o处冷冻。注意：避免重复的冻融循环，并避光。
准备工作溶液
1. Amplite TM Red过氧化物酶工作溶液（1X）：在5 mL的50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的pH 200为2的 H 2 O 2的缓冲液中
加入20μLAmplite TM Red储备液（250X）。 注意：在DTT和b-巯基乙醇等硫醇存在下，Amplite TM Red不稳定。高于10μM（zui终浓度）的硫醇会显着降低测定的动态范围。NADH和guguanggantai（从GSH还原）可能会干扰测定。2. Amplite TM Red H 2 O 2工作溶液（1倍）：添加20μLAmplite TM
红色储备液（250X）溶于5 mL 50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的缓冲液，pH 7，含0.4单位/ mL过氧化物酶。 注意：在DTT和b-巯基乙醇等硫醇存在下，Amplite TM Red不稳定。高于10μM（zui终浓度）的硫醇会显着降低测定的动态范围。NADH和guguanggantai（从GSH还原）可能会干扰测定。
程序
上清液中的过氧化物酶测定
将50 µL 1X Amplite TM Red过氧化物酶工作溶液添加到过氧化物酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总过氧化物酶测定体积为100 µL /孔。 注意：对于384孔板，请在每个孔中加入25 µL样品和25 µL 1X Amplite TM Red过氧化物酶工作溶液。
在避光条件下，室温下孵育反应10至30分钟。
使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。
空白孔（仅使用分析缓冲液）中的荧光用作对照，并通过过氧化物酶反应从那些孔的值中减去。
上清液中的H 2 O 2测定
在H 2 O 2标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL 1X Amplite TM Red H 2 O 2工作溶液，使总H 2 O 2分析体积为100 µL /孔。 注意：对于384孔板，请在每个孔中加入25 µL样品和25 µL 1X Amplite TM Red H 2 O 2工作溶液。
在避光条件下，室温下孵育反应10至30分钟。
使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。
空白孔（仅使用测定缓冲液）中的荧光用作对照，并通过H 2 O 2反应从那些孔的值中减去。
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