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常见的报道基因包括β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸苷酶和萤光素酶。通用的报告基因是萤火虫荧光素酶。由于这些报告分子较小且不需要ATP，因此其他荧光素酶（例如高斯荧光素酶）的使用稳步增加。来自海洋co足纲高斯王子的生物发光酶在表达后可有效地从哺乳动物细胞中分泌出来。高斯荧光素酶是一种20kDa的蛋白质，可通过氧气催化腔肠素氧化，从而产生光。我们的Amplite™高斯荧光素酶报道基因检测试剂盒使用专有的发光配方来定量细胞培养基中的荧光素酶活性。我们的配方可产生一种发光产品，当与高斯荧光素酶相互作用时，该发光产品会发出强烈的光。该套件提供了与HTS液体处理仪器兼容的所有基本组件。该试剂盒具有很高的灵敏度，可以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行。半衰期为一小时的“发光型”信号在大量测定板中提供一致的信号。该测定法是兼容的标准细胞生长培养基。
| 发光酶标仪 | |
| 推荐板 | 纯白色 |
| 成分A：萤光素酶底物（光敏） | 1个小瓶 |
| 组分B：反应缓冲液 | 1小瓶（50 µL） |
| 组分C：测定缓冲液 | 1瓶（5毫升） |
- 准备样品（50 µL）
- 加入50 µL高斯荧光素酶工作溶液
- 在室温下孵育10-15分钟
- 监控发光强度
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.高斯荧光素酶原液（100X）：
将50 µL（对于Cat＃12530），0.5 mL（对于Cat＃12531）或2.5 mL（对于Cat＃12532）反应缓冲液（组分B）转移到1小瓶荧光素酶底物中（组分A），并混合均匀。
准备工作溶液
使用1：100稀释因子和测定缓冲液（组分C）稀释100X高斯萤光素荧光素酶测定储备液，以制备高斯萤光素荧光素酶工作溶液。注意：重新配制的高斯荧光素酶工作溶液对光非常敏感。它不稳定，应准备新鲜，放在冰上，并在2小时内使用。
程序
- 通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）来用测试化合物处理细胞（或样品）。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。
- 将细胞板在37°C，5％CO 2培养箱中孵育所需的时间，通常为4小时至过夜。
- 运行高斯荧光素酶测定：将连续稀释的高斯荧光素酶或培养上清液的50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板移液到微量滴定板中，然后与50 µL /孔/ 96-孔混合。孔板或高斯荧光素酶工作溶液的12.5 µL /孔/ 384孔板。
- 在避光的条件下，在室温下孵育平板10至15分钟。
- 用发光计读取发光强度。
12531 Amplite™高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒 Amplite™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 10 Plates 12532 Amplite™高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒 Amplite™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 100 plates 12535 Amplite™海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 1 plate 12536 Amplite™海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 10 plates 12537 Amplite™海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 100 plates 12551 Amplite™ 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒 Amplite™ Colorimetric Beta-Lactamase Activity Assay Kit 200 Tests
