天冬氨酸（或天冬氨酸）是带负电荷的极性氨基酸。天冬氨酸在嘧啶生物合成的控制点，转氨反应，与天冬酰胺的相互转化，导致AMP的代谢途径，尿素循环中起作用，并且是高siansuan，suansuan，异liangansuan和蛋氨酸的前体。它也参与苹果酸天冬氨酸穿梭。Amplite™荧光天冬氨酸测定试剂盒提供了灵敏的荧光测定法，用于定量生物样品中的天冬氨酸。天冬氨酸转化为丙酮酸，通过酶偶联反应生成过氧化氢。用Amplite™Red底物监测天冬氨酸产生的过氧化氢的量，通过荧光酶标仪对天冬氨酸进行定量。

1. 准备测试样品以及稀释的天冬氨酸标准液（50 µL）

2. 加入等体积的工作溶液（50 µL）

3. 在37°C下孵育20-30分钟

4. 监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

重要说明
使用前，请在室温下解冻套件的组件。为了获得*效果，建议使用黑色印版。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1.天冬氨酸标准溶液（10 mM）：
将100 µL ddH ₂ O加入天冬氨酸标准样品瓶（组分E）中，制成10 mM天冬氨酸标准溶液。

2. Amplite™Red底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分F）添加到Amplite™Red底物（组分A）中，制成200X Amplite™Red底物储备液。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

将10 µL 10 mM天冬氨酸标准液加到990 µL 1X PBS缓冲液中，得到100 µM天冬氨酸溶液（ASP7）。然后在1X PBS缓冲液中进行1：3的系列稀释，以得到系列稀释的天冬氨酸标准品（ASP6-ASP1）。

准备工作溶液

1.转换混合物溶液（100X）：
将50 µL ddH ₂ O加入转换混合物（组分D）中，制成100X转换混合物储备溶液。

2. Amplite™Red工作溶液：
将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中；混合均匀。将100μLddH ₂ O加入一个酶混合物2小瓶中（组分B2）; 混合均匀。将整个小瓶（100μL）的酶混合液2、25μL的200X Amplite™Red底物储备液和50μL的100X Conversion Mix溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中并充分混合。 注意：  工作溶液不稳定，请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

程序

表1.黑色96孔微孔板中天冬氨酸标准品和测试样品的布局。ASP =天冬氨酸标准品（ASP1-ASP7，0.1至100 µM）；BL =空白对照；TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和表2中提供的布局准备天冬氨酸标准品（ASP），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
   

2. 在天冬氨酸标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL Amplite Red™工作溶液，以使天冬氨酸总测定体积为100 µL /孔。对于384孔板，将25 µL工作溶液加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。注意：在pH 6.5至7.0下进行天冬氨酸测定。
   

3. 将反应混合物在37°C孵育20-30分钟。
   

4. 用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）下监测荧光的增加。

数据分析

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从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值即可得到基线校正值。然后，绘制标准读数，以获得标准曲线和方程式。该方程式可用于计算天冬氨酸样品。