钙通量测定法是在药物开发中筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的方法。Screen Quest™Calbryte-590™无探针和免洗的钙含量测定试剂盒提供了zui稳定的基于均相红色荧光的测定,可检测细胞内钙的动员。表达感兴趣的GPCR(通过钙信号)的细胞预先装有我们专有的Calbryte-590 AM,可以穿过细胞膜。Calbryte-590 AM是用于HTS筛选的zui亮的钙指示剂。一旦进入细胞内,Calbryte-590 AM的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解,产生带负电荷的荧光染料,并留在细胞内部,与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时,受体信号释放细胞内钙,大大增加了Calbryte-590 AM的荧光。Calbryte-590 AM具有出色的细胞滞留性,高灵敏度以及荧光增加100-250倍(当与钙形成复合物时)的特性,使其成为测量细胞钙的理想指标。Calbryte-590 AM是不需要binghuangshu以改善细胞保留能力的红色钙染料。Screen Quest™Calbryte-590™无探针和免洗的钙测定试剂盒提供了*化的测定方法,用于监测GPCR和脆弱或困难细胞系的钙通道。与基于绿色荧光的钙测定相比,该测定试剂盒对化合物库中有色化合物的干扰较小。它还与用于高含量分析的GFP细胞系兼容。该测定可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并易于适应自动化。
荧光酶标仪 | |
激发 | 540纳米 |
发射 | 590纳米 |
隔断 | 570纳米 |
推荐板 | 黑墙/透明底 |
仪器规格 | 底部读取模式/可编程液体处理 |
其他 | |
FDSS,ViewLux,NOVOStar,ArrayScan,FlexStation,IN细胞分析仪 |
组件
组件A:Calbryte™590上午 | 1个小瓶 |
组分B:10倍Pluronic®F127 Plus | 1瓶(1毫升) |
成分C:HHBS(具有20 mM Hepes的汉克斯缓冲区) | 1瓶(9毫升) |
在生长培养基中准备细胞
添加Calbryte™590 AM染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
在室温或37°C下孵育45-60分钟
在Ex / Em = 540/590 nm处监控荧光
重要说明
使用前,请在室温下解冻所有套件组件。
储备溶液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. Calbryte™590 AM储备溶液:
将20 µL(目录号36200)或200 µL(目录号36201和#36202)的DMSO加入小瓶Calbryte™590 AM(组分A)中并充分混合。注意:20 µL Calbryte™590 AM储备溶液足以装一板。如果未密封的Calbryte™590 AM储备溶液可以将试管等分,则可在< -20 o C的温度下等分一个月,然后保存 超过一个月。注意:避光,并避免重复的冻融循环。
2.测定缓冲液(1×):
HHBS的混合9毫升(成分C,不包括在试剂盒 目录号36202。 )被1个10X毫升的Pluronic ® F127加(10X)(成分B)和它们混合均匀。
准备工作溶液
Calbryte™590 AM染料加载溶液:
将20 µL Calbryte™590 AM储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(1X)中,并充分混合。 注意: 该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。 注意: 10 mL染料加载溶液足以用于一块96孔板。
程序
将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Calbryte™590 AM染料加载溶液添加到细胞板中。
在细胞培养箱中将染料加载板孵育60分钟,然后在室温下将板再孵育15-30分钟。 注意: 如果测定需要37°C,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作,则在室温下孵育细胞板1小时(建议孵育时间不超过2小时)。
用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。
通过监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量测定法。
36201 Screen Quest™ Calbryte 590™免bbinghuangshu和免洗钙检测试剂盒 Screen Quest™ Calbryte-590™ Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit 10 Plates 36202 Screen Quest™ Calbryte 590™免bbinghuangshu和免洗钙检测试剂盒 Screen Quest™ Calbryte-590™ Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit 100 Plates 36300 Screen Quest™10X细胞染色缓冲液 *含酚红* Screen Quest™ 10X cell staining buffer with Phenol Red Plus™ 10 Plates 36301 Screen Quest™10X钙离子检测缓冲液 *含酚红* Screen Quest™ 10X calcium assay buffer with Phenol Red Plus™ 10 Plates 36305 Screen Quest™发光法钙离子检测试剂盒 Screen Quest™ Luminometric Calcium Assay Kit 10 Plates 36306 Screen Quest™发光法钙离子检测试剂盒 Screen Quest™ Luminometric Calcium Assay Kit *10X10 Plates* 100 Plates