钾（K +）离子通道在调节基本生物过程（包括心率，激素和神经递质分泌，水和电解质平衡）中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐，疼痛，糖尿病，神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl +通过K +通道的渗透性已被广泛用于测定K +通道。表达感兴趣的K +通道的细胞（例如hERG，Kv1.3，Kir2.1，KATP）预先装有Tl +敏感染料。该染料是非荧光的，并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后，非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为带负电荷的染料，并留在细胞内部。当将含有低剂量Tl +的刺激缓冲液添加到细胞中时，Tl +流过K +通道并与Tl +敏感染料结合，产生荧光信号。该信号与K +通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞，则荧光信号分别降低或升高，以反映K +通道的抑制或刺激活性。

1. 在生长培养基中准备细胞

2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）

3. 在37°C孵育1小时

4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟

5. 添加Tl ₂ SO ₄ / K ₂ SO ₄ 刺激溶液（96孔板为50 µL /孔，384孔板为12.5 µL /孔）

6. 监测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

重要说明
请勿添加其他binguangshu。使用前，请在室温下解冻所有套件组件。

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. TI-520 AM储备溶液：
将20 µL（目录号36550）或200 µL（目录号36551和＃365552）的DMSO加入到TI-520 AM（组分A）的小瓶中，并充分混合。注意：未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并保存在  <  -20  ^o C下。避光，并避免重复的冻融循环。

2.测定缓冲液（1×）：
添加1个10X毫升的Pluronic ^®  F127加（成分B）到9ml HHBS缓冲液（成分C）的并充分混合。注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。分装和储存未使用10X的Pluronic ^®  F127加（成分B），在  <  -20  ^ö C.避光和避免反复冻融。

3.无氯缓冲液（1X）：
在8 mL ddH ₂ O中加入2 mL无氯缓冲液（5X）（组分D），并充分混合。

4. Tl ₂ SO ₄溶液（未提供，Sigma Cat＃208191）：将
Tl ₂ SO ₄溶解在超纯水中至终浓度为80 mM。注意：Tl ₂ SO ₄有毒。采取必要的预防措施，以防止吸入和皮肤接触。

准备工作溶液

1. TI-520 AM染料加载溶液：
将20 µL TI-520 AM储备溶液（500X）加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液（5X）：
在1X无氯化物缓冲液中用Tl ₂ SO4 稀释配体（用于非电压门控钾通道）或K ₂ SO4（用于电压门控钾通道）。

表1.  参考（用于HEK293-KCNH ₂电池中的电压门控hERG通道），Tl ₂ SO ₄和K ₂ SO ₄（用于电压门控钾通道）或配体（用于非电压门控钾通道）的浓度应针对每个靶通道和细胞类型优化化验。