过氧化物酶是一个小分子（MW〜40 KD），通常可以以4：1的比率与抗体偶联。由于其体积小，它很少会引起抗体/抗原复合物形成的位阻问题。与其他标记酶相比，过氧化物酶便宜。与过氧化物酶有关的主要缺点是它们对许多防腐剂的耐受性低，即使在低浓度下也能使过氧化物酶的活性失活。HRP偶联物被广泛用作ELISA，免疫组织化学技术以及Northern，Southern和Western印迹分析的辅助检测试剂。我们提供一种快速，快速（10分钟）的HRP分析，它是一步一步，均匀，无需洗涤的分析系统。该试剂盒可用于ELISA，表征酶反应动力学以及高通量筛选氧化酶抑制剂等。

平台

组件

1. 准备HRP标准和/或测试样品（50 µL）

2. 加入HRP工作溶液（50 µL）

3. 在室温下孵育10-30分钟

4. 监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 575 nm）的荧光强度

重要笔记
开始实验之前，请在室温下解冻所有试剂盒组件。在硫醇如DTT和β-巯基乙醇的存在下，组分A是不稳定的。浓度高于10 µM的硫醇的存在会大大降低测定的动态范围。NADH和guguanggantai（还原形式：GSH）可能会干扰测定。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Amplite™红色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250 µL DMSO（组分E）添加到Amplite™红色过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中，制成100X Amplite™红色过氧化物酶底物原液。储备溶液应及时使用。远离光线。

2. HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1 mL测定缓冲液（组分C）添加到辣根过氧化物酶（组分D）小瓶中，制成20 U / mL HRP标准溶液。

3. H ₂ O ₂储备溶液（20 mM）：
将22.7 µL的3％H ₂ O ₂（0.88 M，组分B）添加到977 µL的测定缓冲液（组分C）中，制成20 mM H ₂ O ₂储备溶液。注意：稀释的H ₂ O ₂溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

在1999 µL分析缓冲液（组分C）中加入1 µL 20 U / mL HRP标准溶液，得到10 mU / mL HRP标准溶液（SD7）。取10 mU / mL HRP标准溶液（SD7）并进行1：3连续稀释，以使用测定缓冲液（组分C）获得连续稀释的HRP标准溶液（SD6- SD1）。

准备工作溶液

将50μL的100X Amplite™红色过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20 mM H ₂ O ₂储备溶液添加到4.9 mL的测定缓冲液（组分C）中，制成HRP工作溶液。远离光线。