酪蛋白被认为是广谱danbaimei的通用底物。作为天然酪蛋白，这种荧光素酪蛋白被许多danbaimei水解，并广泛用于荧光检测danbaimei活性。在完整的底物中，酪蛋白被5-FITC大量标记，导致明显的荧光猝灭。danbaimei催化的水解减轻了其猝灭作用，产生了鲜绿色荧光染料标记的短肽。荧光强度的增加与danbaimei活性成正比。我们不建议将该缀合物用于荧光偏振测定。对于荧光偏振，我们可以定制制作轻度标记的荧光素酪蛋白偶联物。

酪蛋白的化学性质
外观：浅黄色粉末
激发/发射：494/521 nm
溶剂：水

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，制备后应储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

酪蛋白，FITC结合的原液：
在PBS缓冲液中制成5-10 mg / mL酪蛋白，FITC结合的原液。

准备工作溶液

酪蛋白FITC偶联的工作溶液（2X）：
将FITC偶联的原液稀释至100-400μg/ mL的50-100 mM Tris缓冲液（pH 7.4）。2X Assay工作溶液设计用于检测yiningrudanbaimei，yidanbaimei，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参考表1中合适的测定缓冲液配方。对于每种蛋白酶，应通过实验确定测定工作溶液的*浓度。

程序

1. 将等体积的yidanbaimei标准品或样品与2X Assay工作溶液混合。
   

2. 在Ex / Em = 490/525 nm处监测荧光的增加。
   
   一种。对于动力学读数：立即开始连续连续测量荧光强度，并每5分钟记录一次数据，持续30分钟。
   
   b。对于终点读数：在避光的条件下，将反应在所需温度下孵育30至60分钟。然后测量荧光强度。

表1.测定工作溶液的适当测定缓冲液配方。