6
活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。但是，在与氧化应激相关的状态下，ROS水平会急剧增加。ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎性疾病，许多神经退行性疾病和癌症中的作用已得到*。ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。Cell Meter™荧光ROS检测试剂盒使用我们*的ROS传感器来定量活细胞中的ROS。ROS Green具有细胞渗透性。与ROS反应时会生成绿色荧光。该套件是经过优化的“混合阅读” 与HTS液体处理仪器兼容的测定形式。Cell Meter™荧光ROS测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在培养一小时后检测活细胞中的细胞内ROS。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松实现自动化。使用荧光酶标仪或荧光显微镜可轻松读取其信号。
| 荧光显微镜 | |
| 激发 | FITC过滤器 |
| 发射 | FITC过滤器 |
| 推荐板 | 黑墙/透明底 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发 | 490纳米 |
| 发射 | 525纳米 |
| 隔断 | 515纳米 |
| 推荐板 | 黑墙/透明底 |
| 仪器规格 | 底读模式 |
| 组分A：Amplite™ROS绿 | 1个小瓶 |
| 组分B：测定缓冲液 | 1瓶（20毫升） |
| 成分C：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
- 在生长培养基中准备细胞
- 添加Amplite™ROS Green工作溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
- 将细胞在37°C染色60分钟
- 用测试化合物处理细胞以诱导ROS
- 在Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）或带有FITC滤光片组的荧光显微镜下监控荧光增加（底部读取模式）
重要说明
开始实验之前，请在室温下解冻所有试剂盒组件。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，制备后应储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. Amplite™ROS Green储备溶液（500X）：
将40 µL DMSO（组分C）添加到Amplite™ROS Green（组分A）小瓶中，并充分混合以制成500X Amplite™ROS Green储备溶液。避光。注意：20 µL 500X Amplite™ROS Green储备溶液足以用于1个板。为了存放，请将管子紧紧密封。
准备工作溶液
将20 µL 500X Amplite™ROS Green储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Amplite™ROS Green工作溶液。注意：此Amplite™ROS Green工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
程序
- 将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Amplite™ROS Green工作溶液添加到细胞板中。
- 将细胞在5％CO 2和37°C的培养箱中孵育1小时。
- 在所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用20 µL 11X测试化合物（96孔板）或10 µL 6X测试化合物（384孔板）处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。
- 为了诱导ROS，在室温下孵育或在5％CO单元板2，37℃的培养箱中至少15分钟或在期望的时间段（30分钟Hela细胞用1mM H处理2 ö 2）。
- 使用荧光酶标仪（Ext / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm））监控荧光强度，或使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。
22900 Cell Meter™荧光法胞内总ROS检测试剂盒 *绿色荧光* Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Green Fluorescence* 200 Tests 22901 Cell Meter™荧光法胞内总ROS检测试剂盒 *红色荧光* Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Red Fluorescence* 200 Tests
