5
产品描述
LbCas12a (又名Cpf1)核酸酶来源于Lachnospiraceae bacterium ND2006菌株。LbCas12a是由crRNA介导的DNA核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM (TTN) 序列的情况下，特异地剪切靶标双链DNA，使DNA双链断裂并生成粘性末端。而LbCas12a特异地剪切单链DNA靶标不依赖PAM序列。此外，双链或单链DNA靶标均能激活LbCas12a的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，即当LbCas12a酶与crRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性，将体系中的任意序列ssDNA切碎。因此，LbCas12a酶不仅可用于体外dsDNA的特异剪切，也可用于靶标核酸的快速检测，详见本公司开发的HOLMES[1]核酸快检技术。
本产品将无甘油LbCas12a核酸酶冻干，可用于常温运输及保存，使用配套的冻干Cas酶复溶液复溶后，具有与本公司非冻干型LbCas12a (Cpf1) Nuclease（#32108）同等的反应活性。本产品包括可用于单个反应的酶冻干粉及冻干球等多种冻干形态，满足不同下游反应体系构建的需求。
产品组分
组分 | V32108E-01 | V32108E-02 |
| ● LbCas12a Lyophilized Powder (SCREW CAP TUBES) | 100 μg | 100 μg × 5 |
| ● LbCas12a Reconstitution Buffer | 200 μL | 1 mL |
◆ 建议使用 136 μL 复溶液复溶一管 100 μg 的 LbCas12a 冻干粉，复溶后酶浓度为 5 μM，即 5 pmol/μL。
保存条件
本产品常温保存及运输；复溶后于-20℃保存，避免反复冻融。
实验流程
1.冰上制备如下CRISPR反式剪切反应体系：
组分 | 体积 | 终浓度 |
10 × HOLMES Buffer 1 | 2 μL | 1 × |
5 μM LbCas12a Nuclease a | 1 μL | 250 nM |
10 μM crRNA | 0.5 μL | 250 nM |
1 μM Target DNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
10 μM HOLMES ssDNA Reporter（#31101） | 0.5 μL | 250 nM |
Nuclease-free water | Up to 20 μL |
a.V32108E 系列 LbCas12a 每管含有 100 μg 的 LbCas12a 冻干粉，建议每管加入 136 μL 复溶液，复溶后酶浓度为 5 μM，即 5 pmol/μL。
2.立即放入实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
实验结果
注意事项
2. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
3. 本产品仅包含 Cas 酶，CRISPR 反应体系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制备，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推荐从 TOLOBIO 选购。
4. 复溶后的 LbCas12a 需在冰上配制反应体系，且使用后立即将酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一个月)。
5. 本产品仅供科研使用。
