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产品简介
2 × Tolo Fluorescent LAMP Premix 适用于以 DNA 模板的 LAMP (环介导等温扩增) 反应。LAMP 是常见的等温扩增技术，使用 LAMP 特异性引物和链置换聚合酶 Bst.快速扩增靶标核酸。该试剂盒是 2×预混液，包含 Bst.链置换聚合酶和优化的 LAMP 缓冲液。本产品中采用基因工程改造的 Tolo Bst. DNA polymerase，具有良好的耐热性能，非常适宜 LAMP 扩增。本产品同时提供荧光染料，便于在靶标核酸扩增过程中进行实时荧光监测。
产品组分
组分 | 25102 (100 rxns) |
2 × Tolo Super LAMP Premix | 1.25 mL |
50 × LAMP Floorescent Dye | 50 μL |
保存条件
≤ -20℃储存，≤ 0℃运输；
实验流程
1.制备10 × LAMP Primers Mix：
组分 | 体积 | 10 × 浓度（STOCK） | 1 × 浓度（STOCK） |
FIP Primers（100 μM） | 16 μL | 16 μM | 1.6 μM |
BIP Primers（100 μM） | 16 μL | 16 μM | 1.6 μM |
F3 Primers（100 μM） | 2 μL | 2 μM | 0.2 μM |
B3 Primers（100 μM） | 2 μL | 2 μM | 0.2 μM |
Loop F Primers（100 μM） | 4 μL | 4 μM | 0.4 μM |
Loop B Primers（100 μM） | 4 μL | 4 μM | 0.4 μM |
ddH2O | Up to 100 μL |
◆ 在 nuclease-free water 中制备的 10 ×LAMP Primers Mix 可在–20°C 储存长达 2 年。
2.制备LAMP 反应体系：
组分 | 体积 |
2 × Tolo Super LAMP Premix | 12.5 μL |
10 × LAMP Primers（supplied by user） | 2.5 μL |
50 × LAMP Floorescent Dye | 0.5 μL |
Target DNA | x μL（不超过反应总体积的 1/10） |
ddH2O | Up to 25 μL |
◆ 室温解冻所有组分后置于冰上，短暂涡旋并瞬离后使用。
◆ 吸取反应预混液到所需的反应容器中并添加待测样品，短暂涡旋并瞬离后反应。
◆ 建议设置无模板的阴性对照反应体系，并用等体积的 nuclease-free water 补齐反应体系。
3.LAMP 反应程序
配制完成后，将上述反应体系置于 65℃孵育 30～60 min。对于拷贝数较低的待测靶标或复杂样品类型的反应，可根据需要适当延长扩增时间。85℃加热 5 min 便可灭活体系中的 Bst.酶。
注意事项
1. 可在冰上或室温条件下，将 2 × Tolo Super LAMP Premix 解冻，充分混匀后使用；不推荐对预混液进行加热溶解。
2. 建议反应完成后避免开盖。如需琼脂糖凝胶电泳或其他后续分析，应在分区空间或单独设备中进行开盖。
3. 本产品仅供科研使用。
