制作细胞划痕实验需要注意事项

伤口愈合试验，也通常称为“划痕试验"，是一种广泛建立的研究体外集体细胞迁移的技术。细胞划痕（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为一个空白区域，称为“划痕"。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕"愈合。

制作划痕实验需要注意事项：

1. 细胞的密度；划痕实验一般是几种细胞的结合，但是每种细胞的生长速度会不一样，所以需要按照细胞的生长特性调整培养时间，细胞铺满孔底时划痕的效果会比较好，建议是100%的铺满。

2. 用枪头画线时尽量垂直，以6孔板为例 ，一个孔可以画6条线

3. 画线之后一定要用PBS洗两次，以去除划下的细胞

4. 注意培养方式一定要改成无血清或者低血清的培养基，因为：划痕后用无血清培养基培养细胞，意在说明在监测的 24 小时内，划痕的缩小是细胞 迁移作用的结果，所以要将细胞增殖造成细胞迁移的影响降到蕞低；但若细胞改成无血清培养后大面积漂浮，需要适量加入血清浓度不能高于2%。

5. 放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，10，12，15时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。

6. 统计方法：使用Image J软件打开图片后，抓取自己画的线条，计算细胞间距离的平均值。