50T-登革病毒2型PCR检测试剂盒-上海西格生物科技有限公司

产品名称：登革病毒2型PCR检测试剂盒
英文名称：Dengue Virus(DENV)2RTPCR
编号：XG-P1318
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。

产品特点：
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
包装规格及成分：

编号	成分	十孔盒包装（去纸托）
试剂一	2×PCR MagicMix	1mL（亮黄盖）
试剂二	源性成分 PCR 引物混合液	100 uL（白盖）
试剂三	源性成分 PCR 阳性对照	50 uL（黄盖）
试剂四	超纯水	1 mL（本色盖）
试剂五	DNA 释放剂试用装	50 次（成分见下）
试剂六	免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一	50 uL（白盖）
试剂七	免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二	100uL（绿盖）
试剂八	免 DNA 提取试剂溶液 B	400 uL（红盖）
试剂九	使用手册	400 uL（红盖）

使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线

胰蛋白胨大豆琼脂250g一种通用培养基，用于各种微生物的培养(AOAC

DMEM(高糖)，干粉 "含4500mg/l葡萄糖，L- incubation media DMEM(高糖)，干粉 "含4500mg/l葡萄糖，L-

金耳、黄木耳支/瓶

RODAC培养皿(TSA)(6.5cm)用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测

BufferedSodiumChloride–PeptoneSolution乳酸乙酯etxyl LactateGCS2ml

SM0241GeneRuler 100bp DNA Ladders199

A0486-100GAmmonium Persulfate [APS] 过流铵7727-54-0100g

Coomassie® Brilliant Blue R-250100g

Yeast nitnogen Base without Amino500gANGPTL5 Others Human 人 ANGPTL5 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

CL-0273ECV-304(人脐静脉内皮细胞)5×106cells/瓶×2

人心肌细胞-心房cDNAHCF-aa cDNA

HEL细胞，红白血病细胞人肺腺癌细胞系,PG49细胞表皮角化细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

狗肾细胞隆突型;MDCK superdome

RK3 Others Human 人 kC / RK3 人细胞裂解液 (阳性对照)
登革病毒2型PCR检测试剂盒RoseBengalMedium

肠球菌琼脂(胆汁七叶苷叠钠琼脂) 250(g) incubation media 肠球菌琼脂(胆汁七叶苷叠钠琼脂) 250(g)

发酵培养基 Mannitol Ferment Medium 250克肠道杆菌的鉴别，细菌发酵试验

酪蛋白琼脂250用于蜡样芽孢杆菌的酪蛋白分解试验(GB标准)incubationmedia酪蛋白琼脂250用于蜡样芽孢杆菌的酪蛋白分解试验(GB标准)

T1N0肉汤 250g 用于霍乱弧菌的生长试验(SN标准)TrypticaseSoy-YeastExtractAgar 进口分装 Nω-(4-甲氧基-2,3,6-三磺酰基)-L-精酸 H-Arg(Mtr)-OH.1/2H2O ： 80745-10-4 质量规格： >98%,BR

Mn2+NutrientAgar 进口分装 L-茶酸 L-Theanine ： 3081-61-6 质量规格： ≥98%,BR

MMO-MUGMedium 进口分装 L-谷酸-5-叔丁酯-1-甲酯盐酸盐 L-Glutamic acid 5-tert-butyl 1-methyl ester hydrochloride ： 1582963 质量规格： >95%,BR

BufferedPower-nitratemedium 进口分装 L-精酸甲酯二盐酸 H-Arg-OMe•2HCl ： 26340-89-6 质量规格： >99%,BRPRAP1 Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人细胞裂解液 (阳性对照)

滑膜细胞培养基SM

人淋巴细胞;1301

大鼠胰岛细胞瘤细胞;INS-1 神经上皮瘤细胞，SK-N-MC细胞 MPC细胞，小鼠垂体细胞

HT-29, 人结肠癌细胞 Human

CD200R1 Others Mouse 小鼠 CD200R1 / OX-2R 人细胞裂解液 (阳性对照)

技术原理：

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。