当前位置:上海西格生物科技有限公司>>PCR试剂盒>>PCR检测试剂盒>> 50T立克次体通用PCR检测试剂盒
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
产品名称:立克次体通用PCR检测试剂盒
英文名称:Rickettsia spp.PCR
编号:XG-P2027
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
包装规格及成分:
编号 | 成分 | 十孔盒包装(去纸托) |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黄盖) |
试剂二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白盖) |
试剂三 | 源性成分 PCR 阳性对照 | 50 uL(黄盖) |
试剂四 | 超纯水 | 1 mL(本色盖) |
试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次(成分见下) |
试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL(白盖) |
试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL(绿盖) |
试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL(红盖) |
试剂九 | 使用手册 | 400 uL(红盖) |
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
酚红葡萄糖肉汤250g用于蜡样芽孢杆菌葡萄糖分解试验(SN标准)
结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA) Violet Red Bile Agar 用于大肠菌群的固体平板检测(GB2008、SN标准)
红指示剂盒 10ml*1 用于红试验配套试剂
葡萄糖肉汤250g/瓶用于溶血性链球菌增菌incubationmedia葡萄糖肉汤250g/瓶用于溶血性链球菌增菌
*麦康凯琼脂添加剂 1ml*5 每200mlHB0121培养基中添加1支(含*0.01mg和亚碲酸钾0.5mg)AntibioticAgar 进口分装 超细高岭土(6000(3.5um)) Kaolin(superfine) : 1332-58-7 质量规格: 6000(3.5um)
m-GREENYEASTandFUNGIBROTH 进口分装 (光谱级,≥99.5%(GC)) Pyridine : 质量规格: 光谱级,≥99.5%(GC)
马铃薯-蔗糖培养基 进口分装 化铯(用于高通量质谱,99.9995%) Cesium iodide : 7789-17-5 质量规格: 分析标准品,用于高通量质谱,99.9995%
面包酵母标准培养基 进口分装 四己基铵(用于离子色谱,≥99.0%(T)) Tetrahexylammonium hydrogensulfate : 32503-34-7 质量规格: 用于离子色谱,≥99.0%(T)CD33 Others Mouse 小鼠 CD33 / Siglec-3 人细胞裂解液 (阳性对照)
人脑瘤细胞;SF126
MPC-83 胰腺腺泡细胞癌
IMR-32人神经母细胞瘤细胞 IMR-32 human neuroblastoma cells MEM培养基(GIBCO)+10%FBS
THPO Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 标签)
人上皮细胞;MCF-10A 人前列腺平滑肌细胞*培养基 100mL
立克次体通用PCR检测试剂盒APT琼脂250g用于乳酸菌分离培养
60g/L氯蛋白胨肉汤 60g%/L NaCl Peptone Water 用于副溶血性弧菌的前增菌培养(SN标准)
马血清 Horse serum 200毫升 BR
GAM半固体培养基250g/瓶用于厌氧菌的保存,若需要,每培养基中可选择性添加004和incubationmediaGAM半固体培养基250g/瓶用于厌氧菌的保存,若需要,每培养基中可选择性添加004和1005
M-EndoMedium* 进口分装 人庚肝抗体(HGVAb)ELISA试剂盒
* 进口分装 人干扰素调节因子(IRF)ELISA试剂盒
氟达拉滨磷酸酯 进口分装 人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA试剂盒
草酸依地普仑/草酸* 进口分装 人多药耐药相关蛋白(MRP)ELISA试剂盒JAM3 Others Human 人 JAM3 / JAM-C 人细胞裂解液 (阳性对照)
U-2 OS, 人骨肉瘤细胞
人支气管上皮样细胞;BEAS-2B
HKC细胞,人胚肾上皮细胞 大鼠肺泡巨噬细胞,NR8383细胞 CL-0381MDA-MB-175VII(人导管癌细胞)5×106cells/瓶×2
C918(人眼脉络黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
HWP-c visceral 人类白前脂肪细胞(HWP)内脏 500,000cells 人肠微血管内皮细胞HIMEC
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