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产品名称:猪类圆线虫PCR检测试剂盒
英文名称:Strongyloides ransomiPCR
编号:XG-P2153
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
包装规格及成分:
编号 | 成分 | 十孔盒包装(去纸托) |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黄盖) |
试剂二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白盖) |
试剂三 | 源性成分 PCR 阳性对照 | 50 uL(黄盖) |
试剂四 | 超纯水 | 1 mL(本色盖) |
试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次(成分见下) |
试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL(白盖) |
试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL(绿盖) |
试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL(红盖) |
试剂九 | 使用手册 | 400 uL(红盖) |
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线
ZymomonasMobilisTMedium
Oxford Medium Base incubation media Oxford Medium Base
表皮葡萄球菌 支/瓶
吖啶黄素3.0mg/支*5每支添加于225mlHBJ005中制成LB1肉汤
肉汤琼脂培养基 250g 药品卫生检验,细菌数测定,无菌试验安塞曲匹/脂转移蛋白阻滞剂 进口分装 粒细胞集落刺激因子 (G-CSF)
(标准品) 进口分装 促红细胞生成素受体 ( EPO Receipter)
N-乙酰神经氨酸/唾液酸 进口分装 葡萄糖转运蛋白 (Glut-1)
奈福泮/盐酸平痛新 进口分装 免疫抑制酸性蛋白 (IAP)SMPD1 Others Human 人 SMPD1 / ASM 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
CL-0176OP9(小鼠骨髓基质细胞)5×106cells/瓶×2
人绒毛间叶成纤维细胞裂解物HVMFL
A-704细胞,人肾癌细胞 人肺癌细胞,973细胞 淋巴管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
兔源细胞
TNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人细胞裂解液 (阳性对照)
猪类圆线虫PCR检测试剂盒恶臭醋酸杆菌混浊变种
白色念珠菌ATCC90029冻干粉
猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种
中国台湾根霉
雪白根霉
屎肠球菌(屎链球菌)假结核耶尔森氏菌食用和药用支/瓶 进口分装 普鲁士兰(>98%,BS) Prussian blue : 14038-43-8 质量规格: >98%,BS
金龟子绿僵菌细菌肥料支/瓶 进口分装 化锶(>97%,BR) Strontium fluoride : 7783-48-4 质量规格: >97%,BR
昆明链霉菌产纤维素酶,酿造白酒。支/瓶 进口分装 三苯基磷(>98%,BR) Triphenyl phosphine : 603-35-0 质量规格: >98%,BR
路德类酵母抑制革兰氏阳性细菌、产生蛎灰霉素(属美加霉素类群)。支/瓶 进口分装 4-联苯单乙酸 4-Bi : 5728-52-9 质量规格: >98%,BRIZUMO1 Others Human 人 IZUMO1 人细胞裂解液 (阳性对照)
转PYTL基因小鼠支持细胞;15P-1
KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移) KP-N-NS human adrenal neuroblastoma cells (brain metastasis) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
SF763细胞,人脑瘤细胞 肺炎克雷伯菌 人颅骨造骨细胞总RNAHCO NA
RKO-AS45-1(人结肠癌转基因细胞) 5×106cells/瓶×2
FRhK-4(恒河猴胚肾细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0307SW1116(人结肠腺癌细胞)5×106cells/瓶×2 大耳山羊肾细胞;LDG-2
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
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