当前位置:上海西格生物科技有限公司>>PCR试剂盒>>PCR检测试剂盒>> 50T鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线
本试剂盒不但准确、快速、灵敏,还具有以下特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单。
2. 预期的 PCR 产物长度为 494 bp。
3. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
产品名称 | |
英文名称 | Yersinia pestis()PCR |
货号 | XG-P2291 |
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
包装规格及成分:
编号 | 成分 | 十孔盒包装(去纸托) |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黄盖) |
试剂二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白盖) |
试剂三 | 源性成分 PCR 阳性对照 | 50 uL(黄盖) |
试剂四 | 超纯水 | 1 mL(本色盖) |
试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次(成分见下) |
试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL(白盖) |
试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL(绿盖) |
试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL(红盖) |
试剂九 | 使用手册 | 400 uL(红盖) |
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
T250g用于霍乱弧菌的生长试验(SN标准)
YSG培养基 250g 用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐热耐酸菌的检测。
DTM培养基 DTM Medium 250 用于食品中真菌的培养(Merck方法)
哥伦比亚-MUG琼脂培养基l/瓶用于大肠杆菌荧光检测incubationmedia哥伦比亚-MUG琼脂培养基l/瓶用于大肠杆菌荧光检测
营养琼脂平板(9cm) 10个/包 细菌计数、不含糖,可作血琼脂基础和传代用人生长停滞特异性蛋白6(Gas6)酶联免疫吸附测定试剂盒 进口分装 139-85-5 3,4-Dihydroxy C7H6O3 138.1 Phenols >=98% 20mg
人泪腺富脯酸蛋白4(PRR4)酶联免疫吸附测定试剂盒 进口分装 64439-81-2 10-Hydroxycamptothecin C20H16N2O5 364.35 Alkaloids >=99% 20mg
人脑多巴胺神经营养因子(CDNF)酶联免疫吸附测定试剂盒 进口分装 34420-19-4 Lathyrol C20H30O4 334.45 Diterpenoids >=98% 20mg
人活化蛋白C(APC)酶联免疫吸附测定试剂盒 进口分装 6812-81-3 Roburic acid C30H48O2 440.71 Triterpenoids >=98% 20mgSMPD1 Others Mouse 小鼠 SMPD1 / ASM 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
人晶体上皮细胞永生系;SRA01/04(HLE)
CM-H030人外周血白细胞*培养基100mL
MG-63, 人骨肉瘤细胞 肝癌细胞,CBRH-7919细胞 TT(人骨髓样甲状腺癌细胞)
正常小鼠Sertoli细胞;TM4
CD7 Others Human 人 CD7 人细胞裂解液 (阳性对照)
鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒甲型副伤寒沙门菌冻干粉
居海洛克氏菌
头孢霉
鹿皮色曲霉
佛罗里达无孢子侧耳
氧化微杆菌钠臭,英文名或英文缩写:wo7ium bromide,级别:AR,98%,规格:5克
97-63-2丙烯酸乙酯;异丁烯酸乙酯etxyl metxacrylate;metxacrylic acid etxyl ester
对羟基本酸钠,英文名或英文缩写:4-xy7noxybenzoic acid wo7ium salt,级别:高纯,99%,规格:25克
异樱花亭 isosakuranin (HPLC,≥98%) 480-43-3 5MG 通用试剂
三水多烯 Docqtcxql 148408-66-6GLYCOPROTEIN Others Sudan ebolavirus 苏丹埃博拉病毒 Glycoprotein / GP 人细胞裂解液 (阳性对照)
骨细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7
叙利亚仓鼠皮肤细胞;GH-S1 猫肾细胞,CRFK细胞 Cyc-Tag(S49)细胞,小鼠T淋巴细胞瘤细胞
人胚肺成纤维细胞;HFL-I
CRP Others Mouse 小鼠 CRP / PTX1 人细胞裂解液 (阳性对照)
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
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