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花粉活力检测试剂盒(TTC 法)|茁彩生物

时间:2025-4-28阅读:10
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开花植物的有性受精产物(种子、谷物、水果等)提供了世界上大部分的食物和饲料供应。成功受精很大程度上取决于雄配子体的活性。

在自然条件下,大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时或几天。花期不遇给杂交工作造成困难,有的树木和园林植物可通过延长花期解决,有的不得不进行花粉储藏。

花粉冷冻保存是常见存储方法,可以在较小的空间内保存花粉,甚至是稀有和濒临灭绝的物种,并且可以根据需求将最佳花粉负载应用到柱头上。

花粉冷冻保存过程通常包括一系列脱水、冷却、储存、解冻和再水化,可能会严重影响花粉质量,特别是在工艺条件不理想的情况下。因此,业界采用花粉活力测试作为风险管理工具,以防止由于授粉成功率不足而导致产量损失;另外确定花粉活力,为评估植物的繁殖潜力以及花粉细胞生物学基本问题的基础研究提供了重要质控。

原理

TTC(2,3,5 - 三苯基氯化四氮唑)是一种氧化还原染料。具有活力的花粉在呼吸作用过程中会产生还原物质,这些还原物质能将无色的 TTC 还原成红色的三苯甲臜。根据花粉被染成红色的程度,可以判断花粉的活力。有活力的花粉会被染成红色,活力越高,颜色越深;而无活力的花粉则不会被染色或染色较浅。

操作步骤

花粉采集:选取发育良好、即将开放的花朵,用镊子或毛笔轻轻收集花粉,尽量避免混入杂质。

花粉预处理:将采集到的花粉放入离心管中,加入适量的洗涤液,轻轻振荡或搅拌,然后离心(一般转速为 1000 - 2000 转 / 分钟,离心时间为 3 - 5 分钟),弃去上清液,重复洗涤 2 - 3 次,以去除花粉表面的杂质。

染色:向经过预处理的花粉中加入适量的 TTC 溶液和缓冲液,使花粉充分悬浮在溶液中。一般 TTC 溶液与缓冲液的体积比为 1:1 或根据试剂盒说明书进行配制。将混合液在黑暗条件下室温孵育 15 - 30 分钟,让 TTC 与花粉充分反应。

观察与计数:孵育结束后,取一滴染色后的花粉悬浮液滴在载玻片上,盖上盖玻片,在显微镜下观察花粉的染色情况。可以选择多个视野进行观察,并统计被染成红色的花粉数量和未被染色的花粉数量,计算花粉活力百分比。花粉活力(%)=(红色花粉数 / 总花粉数)×100%。


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