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Cy7酪胺是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cy7酪胺。
适用仪器
荧光显微镜 | |
Ex: | Cy3/TRITC滤波片 |
Em： | Cy3/TRITC滤波片 |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
滤波片: | Cy3/TRITC滤波片 |
实验方案
样品染色示例
概述
1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟
操作步骤
在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C，避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。
1.制备储存溶液
Tyramide原液（1000X）加入适量的DMSO，制成1-5mM的酪胺储备液。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存
2.制备工作溶液
Tyramide工作溶液（1X）：
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。
3. 细胞固定和透化
4. 3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。
4.过氧化物酶标记
4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，在室温下用PBS冲洗两次。
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物S蛋白，建议通过生物S阻断缓冲液阻断内源性生物S。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。
5.酪胺标记
5.1为每个样品准备并应用100μL酪胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
5.2用PBS冲洗三次。
6.荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪胺标签的信号。
表1.推荐用于核复染的产品
货号 | 产品名称 | Ex/Em(nm) |
17548 | Nuclear Blue DCS1 | 350/461 |
17550 | Nuclear Green DCS1 | 503/526 |
17551 | Nuclear Orange DCS1 | 528/576 |
17552 | Nuclear Red DCS1 | 642/660 |
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