百萤课堂之-多重Caspase活性

时间：2023/9/1阅读：67

半胱an酸蛋白酶，半胱an酸-天冬氨酸蛋白酶或半胱an酸依赖性天冬氨酸定向蛋白酶，是一个半胱an酸蛋白酶家族，在细胞凋亡(细胞程序性死亡) ，坏死和炎症中发挥重要作用。半胱an酸天冬氨酸蛋白酶在细胞发育和成年生命的大多数其他阶段是很有必要的，并且因其在细胞中的作用而被称为“刽Z手"蛋白质。一些半胱天冬酶在免疫系统中也是淋巴细胞成熟所必需的。细胞凋亡的失败是肿瘤发生和自身免疫性疾病的主要原因之一。也有报道说，不必要的细胞凋亡发生在缺血或阿尔茨海默病。这些新发现激发了人们对半胱天冬酶作为潜在治疗靶点的兴趣，因为它们是在20世纪90年代中期发现的。

Caspase 3/7活性细胞凋亡测定试剂盒的目的是通过测量 Caspase 3活性来监测细胞凋亡。半胱an酸天冬氨酸蛋白酶3被广泛认为是细胞凋亡的可靠指标，因为半胱an酸天冬氨酸蛋白酶 -3(CPP32/载脂蛋白酶)的激活对于细胞凋亡的启动是重要的。半胱an酸天冬氨酸蛋白酶3对氨基酸测序天冬氨酸-谷an酸-谷an酸-天冬氨酸具有底物选择性。试剂盒中使用 Z-devD-ProRedTM 作为半胱天冬酶 -3活性的荧光指示剂。通过半胱天冬酶3切割 ProRedTM devD 阻断肽残基产生强烈的红色荧光 ProRedTM，其在约620nm 处荧光测定，在约530nm 处激发。

Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒提供了一个优化的检测方案的所有必需成分。该检测方法稳定可靠，可以很容易地适用于各种荧光平台的高通量检测，如微板检测。使用96孔格式的每孔100μL 试剂，该试剂盒提供足够的试剂进行100次测定。使用384孔格式的每孔25μL 试剂，该试剂盒提供足够的试剂来执行400次测定。

Cell Meter Caspase3/7活性检测试剂盒主要特点：

1. 多色功能，可以使用不同颜色的荧光指示剂同时检测不同类型的半胱an酸活化，如半胱an酸8、9和10；

2. 稳定性好，只需将试剂和细胞混合后，即可直接读取结果，无需细胞裂解或透化细胞膜；

3. 方便性高，与常用的滤光片组合兼容。

Jurkat 细胞中 caspase 3 7的活性.png

图1.检测 Jurkat 细胞中 caspase 3/7的活性。在同一天以200,000个细胞/孔/90μL 在 Costar 黑色壁/透明底部96孔板中接种 Jurkat 细胞。用或不用1μM 星形孢素处理细胞5小时。加入半胱天冬酶3/7测定溶液(100μL/孔) ，室温孵育1小时。荧光强度在 Ex/Em = 540/620nm 处测定。

AMC、 R110和 ProRedTM 在 pH 为7.0的缓冲液中的荧光光谱.png

图2.AMC、 R110和 ProRedTM 在 pH 为7.0的缓冲液中的荧光光谱。AMC，R110和 ProRedTM 半胱天冬酶底物非常适合于多路复用半胱天冬酶活性。

试剂盒	平台	Ex(nm)	Em(nm)	货号
Caspase3/7活性细胞凋亡检测试剂盒“蓝色荧光"	微孔板，HCS	360	570	22796
Caspase3/7活性细胞凋亡检测试剂盒“绿色荧光"	微孔板，HCS	490	525	22796
Caspase3/7活性细胞凋亡检测试剂盒“红色荧光"	微孔板，HCS	540	620	22797
Caspase8活性细胞凋亡检测试剂盒“蓝色荧光"	微孔板，HCS	370	450	22812
Caspase8活性细胞凋亡检测试剂盒“绿色荧光"	微孔板，HCS	490	525	22812
Caspase8活性细胞凋亡检测试剂盒“红色荧光"	微孔板，HCS	540	620	22816
Caspase9活性细胞凋亡检测试剂盒“红色荧光"	微孔板，HCS	375	435	22813
Caspase9活性细胞凋亡检测试剂盒“蓝色荧光"	微孔板，HCS	490	525	22798
Caspase9活性细胞凋亡检测试剂盒“绿色荧光"	微孔板，HCS	540	620	22816

表1.用于测量Caspase3.7.8.9活性的检测试剂盒

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