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口腔鳞状细胞癌的方法

时间:2013-1-18阅读:461
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口腔鳞状细胞癌的方法
细胞培养
CAL27(人类鳞状细胞癌),GH354(人子宫颈腺癌),HTB-32(人宫颈癌)细胞系,获得自美国典型培养物保藏中心。CAL27细胞被保持在Dulbecco的改性的中等(DMEM)中,4 mM的L-*,调整含有3.7 g / L的钠碳酸氢盐和4.5星,g / L的葡萄糖,1%*(10,000单位/毫升),*(10,000微克/ mL)的溶液和10%胎牛血清(FBS)来自上海科兴生物试剂有限公司75厘米2 BD治疗组织培养烧瓶中,在37℃下和5%CO 2在加湿室。GH354细胞也保持作为与另外的20%FBS的描述。1.5mM的L-*,从ATCC 2200 mg / L的*,和10%FBS,HTB-32细胞保持在McCoy的培养基。

细胞活力
电镀前细胞(粘附,增殖试验),*处理细胞的等分试样使用台盼蓝和活细胞进行染色,通过台盼蓝阴性细胞的数量进行计数,使用VWR科学计数商会枚举和在Zeiss Axiovert 40倒置显微镜。在每一个时间点(1-3天),多口井进行了处理,采用台盼染色,活细胞使用该程序枚举。
它的增殖
HPV感染改变口腔鳞状细胞癌的增殖潜力,为了验证我们的假设,我们进行了CAL27细胞体外增殖实验,以确定的相对影响HPV16转。CAL27,CAL27模拟的转染(MTF)和CAL27转染(HPV16)铺板在含有牛胎儿血清(FBS),以及在不含有血清(NS)的培养基的培养基中,并测定它们的扩散超过三天,在三个单独的,独立的实验。我们的研究结果表明,在显着更高的速度从第1天-第3天CAL27-HPV16细胞增殖,增加5倍以上CAL27中的FBS的媒体(N = 48,P <0.01)。此外,CAL27-HPV16细胞能够增殖,即使在没有血清的速率显着高于非转染CAL27细胞,增加超过3.5倍,从第1天到第3天的组(n = 48,对< 0.01)。

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