肿瘤抑制基因抗体说明书，Anti-P53价格

细胞表面染色

1）   溶解血红细胞。（注意：准备足够的细胞用于10份样品100μl/份检测）。

1ml全血加入14ml恢复至室温的1×FCM溶解液（sc-3621）中。

轻轻混匀，室温孵育3-5min。不要超过5min。

离心5min，弃上清，预冷的5ml 1×PBS轻轻重悬沉淀。

离心5min，弃上清，预冷的1ml 1×PBS轻轻重悬沉淀。

2）准备培养细胞。（注意：本protocol通常处理50ml培养细胞。单层细胞，切勿*消化！用0.2%EDTA/PBS溶液代替。1×PBS洗细胞1次。）

*计数细胞。

1000rpm离心5min，弃上清，用足够的1×PBS轻轻重悬沉淀至终浓度为1×10⁷细胞/ml。

每管加入100μl RBC溶解的全血或单细胞悬液。混匀，放在有盖的冰盒内孵育15-30min。

每管加入1.5ml FCM冲洗缓冲液（sc-3624），颠倒混匀。1000rpm离心5min，弃上清，500μl 1%多聚甲醛重悬沉淀。

测读分析数据。

50ml离心管收集细胞。2000rpm离心5min，弃上清。

室温1×PBS 20ml重悬细胞。

细胞计数。

2000rpm离心5min除去PBS。4℃1×PBS洗1次。2000rpm离心5min除去PBS。

每10⁶个细胞加入1ml 4℃ FCM固定缓冲液（sc-3622），冰育15-30min。

4℃1×PBS洗细胞2次，离心，弃上清。

每10⁶个细胞加入1ml -20℃ FCM渗透缓冲液（sc-3623），逐滴加入混悬。冰育15min。

离心；4℃ FCM冲洗缓冲液（sc-3624）。

2000rpm离心5min，弃上清。每10⁷个细胞加入1ml FCM冲洗缓冲液，然后等分细胞（10⁶）至各待测管中。

细胞内着染：各管加入荧光染料标记的*抗体或isotype control。室温避光孵育1hr。

24hrs内检测分析。