富半*肝素结合蛋白61抗体说明书

siRNA小干扰RNA

l  *天：准备细胞

健康的细胞是成功转染的要求，在转染前明确细胞的生存状态

对于贴壁细胞：

1，吸弃培养基，用*、EDTA、或其他合适的方法分散细胞，在*化前，用无菌的1X PBS漂洗细胞2次。

2，一旦细胞分散，用4倍体积的含10% 胎牛血清不含抗生素的生长培养基（如DEME,RMPI1640）稀释悬浮液 。

（注意：这个阶段使用不含抗生素的培养基是转染成功的关键）

3，1,000 rpm离心5分钟，去除培养基，用不含抗生素的培养基重悬沉淀

4，转移细胞到12孔的细胞培养板 以便细胞过夜培养后，细胞覆盖率达60-80%

（注意：细胞覆盖率也是成功转染的关键）

对于悬浮细胞：

1，1,000 rpm离心5分钟

2，去除培养基，用不含抗生素的含10% 胎牛血清的培养基重悬沉淀

3，转移细胞到12孔的细胞培养板或转到多聚赖氨酸包被的8孔板中，以便细胞过夜培养后，细胞覆盖率达60-80%

（注意：多聚赖氨酸包被是使悬浮细胞黏附到板底必须的）

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l  第二天

 准备转染试剂和转染

 注意：对于不同的实验目的有不同的操作步骤，请根据试验需要选择下面介绍的操作步骤。

l  对于蛋白和转录检测

注意：当在组织培养板中进行不同剂量的siRNA转染时，转染试剂和siRNA转染培养基的用量需要与不同孔的表面积成比率。

1，对每一次转染，在一个无菌的小管里准备下面的混合物 这一步无关细胞培养类型

 （A） 加3.6ul 10uM的siRNA到40ul siRNA转染培养基中，轻柔混合，在室温中放置15分钟 （注意：如果需要低浓度的siRNA，用siRNA稀释缓冲液进行稀释）

（B）加2.4ul siRNA转染试剂到40ul的siRNA转染培养基中，轻柔混合，室温放置5分钟。

注意：虽然siRNA转染试剂对许多细胞都有很高的转染效率，但并不是适用于所有的细胞

 2， 5分钟后，混合A和B形成siRNA-siRNA转染试剂混合物，轻柔混合，室温孵育20分钟。

 3， 然后，向每个含有siRNA-siRNA转染试剂混合物的管中加入0.32ml的siRNA转染培养基，轻柔混合