抗核心蛋白聚糖抗体说明书，DCN抗体价格

对贴壁细胞：

    4.1转染前，吸弃培养基，用1ml无菌siRNA转染培养基洗细胞一次，弃培养基。

4.2在洗过的细胞上，铺稀释的siRNA-siRNA转染试剂混合物，37度，5-7小时

4.3孵育后，向含有转染细胞的每个孔中加0.4ml 生长培养基，其中的血清和抗生素浓度是正常浓度的两倍，无需去除转染混合物。如果，毒性是个问题的话，去除转染混合物，以正常生长培养基代替。再孵育18-24小时

4.4孵育结束后，用新鲜正常生长培养基替换，继续孵育24-72小时

4.5从细胞中吸弃培养基，用1ml 1*PBS洗细胞一次，然后丢弃

4.6放置在冰上，向孔中加入300ul 1*电泳缓冲液，用移液器吹打，混匀。（注意：混合物可能变得粘稠）

如果进行Western blot的话，转移混合物到15ml的锥形管中，放在冰上，对混合物进行超声波降解，每15秒一次，用输出功率的40%。如果，超声后，起很多泡泡，1000转/秒，离心3分钟，然后，按照western blot的方法进行电泳，免疫印迹。

如果做转录分析，按照我们的半定量RT-PCR的操作进行。

抗核心蛋白聚糖抗体说明书，DCN抗体价格对悬浮细胞

4.1在转染前，1000转/秒， 离心5分钟收集细胞。去除培养基，用1ml 无菌的siRNA转染培养基 。

4.2 再次离心1000转/秒，5分钟，去除培养基。用稀释的siRNA-siRNA转染试剂复合物重悬细胞。转移细胞到12孔组织培养板，37°C孵育5-7小时，每次单独转染时重复。

4.3孵育后，加0.4ml含2倍正常血清和抗生物浓度的生长培养基到每个含被转染细胞的孔中，不要去除转染混合物。如果有毒性的话，去除转染混合物，代替以正常生长培养基，在额外孵育18-24小时。

4.4一旦孵育结束，离心细胞，去除培养基。用新鲜的正常生长培养基重悬细胞。转移细胞到12孔组织培养板，继续孵育24-72小时。

如果  需要做western blot分析，则继续以下步骤

转移混合物到15ml的锥形管中。将2*电泳上样缓冲液用Milli-Q超纯水稀释到1* 。1000转离心5分钟，收集细胞，去除培养基，用1ml PBS洗细胞，重复一次，用300ul 1*电泳上样缓冲液重悬细胞，放在冰上，对混合物进行超声波降解，每15秒一次，用输出功率的40%。如果，超声后，起很多泡泡，1000转/秒，离心3分钟，然后，按照western blot的方法进行电泳，免疫印迹。

如果需要转录分析，参照半定量RT-PCR步骤。