试剂

成分

备注

_Tris 缓冲液（1x TBS）

10 mM Tris-HCl, pH 8.0; 150 mM      NaCl

磷酸缓冲液 （1x PBS）

9.1mM 磷酸二钠盐, 1.7 mM 磷酸一钠盐，150 mM 氯化钠

用NaOH.调 pH to 7.4

电泳上样缓冲液 （2x）

1.0 ml 甘油, 0.5 ml ?-巯基乙醇,3.0 ml 10% SDS, 1.25 ml 1.0 MTris-HCl, pH 6.7 和 1–2 mg 溴芬兰，冻存

也可选择没有巯基乙醇的缓冲液，室温存储，使用前加巯基乙醇

DAB

溶解 5 mg DAB在100ml 100mM Tris-HCl, pH 7.6,加0.1 ml     0.3% 过氧化氢

每次准备新鲜的DAB溶液

_RIPA溶液

1x PBS, 1% 湿润剂Nonidet P-40 或表面活性剂Igepal    CA-630, 0.5% 正钒酸钠, 0.1% SDS

使用时加入抑制剂如下：

      1） 10 mg/ml PMSF （sc-3597）  加入剂量10 µl/ml RIPA

      2） Aprotinin （sc-3595） 加入剂量 50 KIU/ml RIPA

      3） 100 mM sodium orthovanadate 加入剂量10 µl/ml RIPA

Subbing solution

0.3% （w/v） 明胶,0.05% 硫酸铬钾

封阻液A

1x TBS, 5%

milk, 0.05% Tween-20

一般使用

封阻液 B

1x TBS, 1%

milk, 1% BSA, 0.05% Tween-20

适用于所有的磷酸化特异抗体的检测

向封阻液中加入 50 mM NaF 抑制磷酸酶活性。