内质网Aβ相关结合蛋白抗体相关信息

WB操作规程
1．设备和试剂
① 电泳电源
Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply （BIO-RAD,Catalog#165-3323）
② 电泳仪及附件
Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell （BIO-RAD,Catalog#165-3301）
③ 电转仪及附件
Mini Teans-Blot Elecreophoresis Transfer Cell （BIO-RAD,Catalog#170- 3930）
④ NC膜
PIERCE，Catalog#88018
⑤ 滤纸
Whatman,3MM CHR

2.试剂
① 凝胶试剂
试剂名称        厂家及规格
30%丙烯酰胺溶液        上海生工
Tris-Base        SIGMA
10%SDS        SIGMA
10%过硫酸铵        上海生工
TEMED        上海生工
② 常用溶液及缓冲液
A．5%积层胶所用溶液
B．分离胶溶液
C．电泳缓冲液，1L
3g Tris-Base、14.4g *、1g SDS，加蒸馏水至IL，pH应该在8.3左右。也可以制成10×的储存液，在室温下长期保存
D．电泳转移缓冲液,1L
3g Tris-Base、14.4g *、甲醇200ml, 加蒸馏水至1L, 也可以制成10×的储存液，在湿温下长期保存
E．5×样品缓冲液,10ml
0.6ml 1mol/L的Tris-HCl（Ph6.8）、5ml 50%的甘油、2ml 10%的SDS、0.5ml 2-巯基乙醇、1ml 1%溴酚蓝，0.9ml的蒸馏水，可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。
③ 二抗稀释液
AP-Anti mouse IgG（Whole molecule）,SIGMA,CAT#A-3562;
AP-Anti mouse IgGAM,ZYMED,CAT#62-6422
一般采取1:3000-1:5000的稀释度，用1%BSA-PBS（含0.05%TWEEN20）稀释
④ 显色底物缓冲液
A.HRP标记二抗底物缓冲液 内质网Aβ相关结合蛋白抗体相关信息 
DAB KIT（KPL LOT NO YM107 CAT：54-10-00）, Tris Buffer 3滴，DAB Substrate 3滴,Peroxide solution 2滴于5ml蒸馏水中，避光，混匀
B.AKP标记二抗底物缓冲液
AKP缓冲液：
0.1mol/L Tris-HCL（PH9.5）, 0.1mol/L NaCL, 5mmol/L MgCL2
BCIP溶液/NBT溶液：
50mg/ml BCIP溶于100%二甲基甲酰胺
50mg/ml BCIP溶于70%二甲基甲酰胺
⑤ 其他试剂
A．        考马斯亮蓝染液，1L
考马斯亮蓝R-250 1.0g、甲醇 450ml、冰醋酸 100ml
B．        考马斯亮蓝脱色液
甲醇 100ml、冰醋酸 100ml、蒸馏水800ml