免疫方法——免疫途径
*常有静脉、腹腔、肌肉、皮下、皮内、淋巴结、脚掌等注射。
*一般采用多点注射方法
-常在足、掌、腋窝淋巴结周围、背部两侧、颌下、耳后等处的皮内或皮下。
-皮内易引起细胞免疫反应,有利于提高抗体的效价。
(3) 免疫方法——免疫途径 (续)
*几点说明:
-大动物一般不用腹腔注射
-颗粒抗原和使用佐剂时不能静脉注射
g抗原即可获得较好的免疫效果。m-抗原宝贵可采用淋巴结内微量注射法,只需10~100
-皮内注射较困难,特别是天冷时更难注入。
(3) 免疫方法——次数及间隔时间
*次数一般为2~3次(初次免疫和加强免疫)
-注射后,10~15天再加强注射;
-剂量同或为的一半,用不全佐剂或不用佐剂。
*间隔时间,一般而言,动物越大,间隔越长
-豚鼠、大鼠为7~8天,兔子为10~15天,羊为14~28天;
-第三次注射的间隔时间更长些,效果更好。
举例1:家兔的免疫
*初次免疫 信号通路Wnt3a抗体相关信息,Anti-Wnt3a
g Ag加入FCA,在背部皮下注射6~8点,每点0.1~0.2ml,也可肌肉内或皮内注射;m-用50~200
*两周后,加强免疫
g Ag于PBS或FIA中,在肌肉、皮下、静脉或腹腔内注射;m-将50~200
*抗体效价的检测:加强免疫一周后,耳缘静脉采血
-抗体效价测定可用环状沉淀试验、琼脂双向扩散法等方法。前者抗体效价在1:4000以上,后者在1:16以上,即可采血,取血清进一步提纯。
举例2:微量抗原淋巴结内注射免疫家兔
*一般选择2.5~3.0kg的新西兰种公兔
-先在其两脚垫注射*福氏佐剂0.2ml(卡介苗每兔合5mg);
-10天后,见胭窝淋巴结肿大,然后将抗原注射至肿大的淋巴结内,*次注射抗原用*福氏佐剂混合乳化;
g;m-以后每隔20天用不*福氏佐剂乳化抗原,以同样方法加强2次,各次注射的抗原均为25~50
-末次注射两周后兔耳放血测价 (可达1:128)。
举例3:豚鼠和大鼠的免疫
*初次免疫
g Ag加入FCA,在背部皮内注射4~6点,每点 0.lml,也可肌肉内或皮下注射;m-用10~100
*加强免疫
g Ag于 PBS或FIA中。在肌肉、皮下或静脉注射;m-每隔 7~8天,将10~50
*抗体效价的检测
(4) 免疫剂量
*抗原性强的抗原量应小,过大反会引起免疫抑制;
*免疫周期长的动物可少量多次注射,短的可大量少次。
(4) 免疫剂量 (续)
*各种动物免疫抗原剂量和加强免疫的剂量
(5) 抗体效价的检测
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