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佐剂 (adjuvant)
*一般可溶性抗原注射后,迅速从注射部位扩散、吸收代谢。佐剂可延长潴留时间,且延长免疫刺激作用。因此在制备抗体的过程中,常将抗原和佐剂一起注射。
*zui常用的佐剂是弗氏佐剂,又分为:
-弗氏不*佐剂(Freund's incomplete adjuvant)
-弗氏*佐剂(Freund's complete adjuvant)
弗氏不*佐剂
(Freund's incomplete adjuvant, FIA)
*是由油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂(羊毛脂或Tween80)混合而成,比例为1:1、2:1、3:1或5:1,可根据需要而定,通常2:1。
*使用时与水溶性抗原按1:1比例充分混合,使抗原分散在佐剂中形成油包水乳剂。
弗氏*佐剂 (Freund's complete adjuvant, FCA)
*在弗氏不*佐剂中加入活卡介苗或死的结核分枝杆菌(终浓度为2~20mg/ml),即成为FCA。
*免疫动物时,将弗氏佐剂与抗原按体积 1:1 混合乳化后(油包水)注入动物。
-一般注射时用*佐剂乳化,第二次或第三次注射时用不*佐剂或不用佐剂。
佐剂与抗原乳化的方法
*研磨法:适于制备大量的佐剂抗原
-先将不*佐剂加热,取1.73ml放人无菌玻璃研钵内;缓缓滴入0.23ml活卡介苗,边滴边按同一方向研磨,使菌体*分散。
-按同样方法滴人抗原,每加一滴应研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢,待抗原全部加人后,应成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
*缺点:研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大,对微量或难得抗原不宜采用。
佐剂与抗原乳化的方法(续)
*注射器混合法 白血病相关新基因抗体相关信息
-将等量的*佐剂和抗原分别吸人两个5ml注射器内,然后插入三通管内,交替推动针管混匀,往复操作直至形成粘稠的乳剂为止。
*优点:无菌操作,节省抗原或佐剂。
*缺点:不易乳化,时间长。
佐剂与抗原乳化的方法(续)
*快速乳化法:利用超声波粉碎器可快速乳化抗原和佐剂混合物。
-将抗原和佐剂按所需量加入一离心管中,置于超声波粉碎器上,粉碎头浸入液面下 0.5cm,离瓶底0.5cm左右,以免打碎离心管。
-每次乳化 10~15s,然后置冰箱lmin左右。反复乳化3~4次即可*乳化。管内残余量800r/min离心5~10min收集。
*优点:简单、快速、节省材料。
乳化剂的鉴定
*判断乳化是否充分,可将一滴乳化好的液体滴在水面上(冷水中),如能长时间保持圆珠形而不散开,表示乳化达到要求。
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