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组织和细胞标本的制备
*标本制备恰当,是免疫组化成功的首要条件
*免疫组化对组织和细胞标本的要求
-保持所检标本原有的结构、形态;
-在原位zui大程度地保持待测抗原(或抗体)的免疫活性,既不淬灭、流失或弥散,也不被隐蔽。
*免疫组化的组织和细胞标本,制作流程与常规处理方法基本相同,但对组织、细胞的处理又有其特殊要求及注意事项。
-各种抗原由于其含量及特性的差异对标本处理方式常有不同要求,因此要选择适用于本实验的*方法。
免疫组化中常用的组织和细胞标本
*组织标本
-石蜡切片
-冰冻切片
*细胞标本
-组织印片
-细胞培养片(细胞爬片)
-细胞涂片
石蜡切片
*石蜡切片是制作组织标本zui常用、zui基本的方法
-zui大优点是组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;
-石蜡块还能长期存档,供回顾研究。
*石蜡切片制作过程对组织内抗原显现有一定的影响,但可通过某些措施予以改善,因而它是大多数免疫组化中的组织标本制作方法。
1、取材的特殊要求及注意事项
*标本新鲜:一般在2h以内进行,超过2h,组织将有不同程度的自溶,其抗原或变性消失,或严重弥散。
*取材部位:除取病灶或含待检抗原部位外,还应取病灶与正常交界处,即所取组织切片中同时应有抗原阳性和阴性区,以形成自身对照。
-细胞坏死后,不仅抗原弥散或消失,而且常引起非特异着色,干扰观察,因此取材时应尽可能避开坏死区。
1、取材的特殊要求及注意事项(续)
*避免挤压:取材时组织受挤压可使边缘部细胞形态改变并加深非特异着色,因而取材时应使用锋利的刀刃;
-镊取组织动作要轻;
-经窥镜直接钳取的组织往往有过度挤压,观察结果时应有所考虑。
2、固定及常用的固定液
*取材后的组织需立刻投于固定剂中
-固定使组织和细胞的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态;
-对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或弥散。
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