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常用固定液:固定剂品种很多,但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同,各有优缺点。
-醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)
-醇类(常用乙醇)
-其它 (丙酮)
(1) 醛类
*甲醛(福尔马林)应用zui广
-原理:形成分子间的交联,影响蛋白构型而使之固定。
-优点:形态结构保存好,且穿透性强,组织收缩少。
-缺点:
*甲醛放置过久可氧化为甲酸,使溶液pH降低,影响染色;
*醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍;
*分子间交联形成的网格结构可能部分或*掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。
-注意事项:
C),为此组织块不宜过厚。°*缩短固定时间,降低固定温度(4
*改用中性缓冲福尔马林,以pH值7.2~7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10%甲醛固定液,减少固定液pH的变化。
*固定后充分水洗以减少分子间交联。
*切片在作免疫组化染色前,先经预处理使抗原再现(抗原修复)。
*戊二醛:
-穿透性强,微细结构保存好,但对抗原有一定影响,常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。
*多聚甲醛(常用4%):
-可用于免疫电镜;也可用于免疫荧光染色。
*主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原,例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。
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