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抗原修复——原因
*常规的石蜡切片标本均用甲醛固定,结果使得:
-抗原性物质形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇;
-蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。
*要求:在染色时,需要*行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。
抗原修复——方法
*化学方法
*加热方法
-水浴加热法
-微波照射法
-高压加热法
-酸水解法
(1) 化学方法
*主要是通过一些酶的作用,使抗原决定簇暴露。常用的酶有:*、*等。
C,10~40min,主要用于细胞内抗原的显示;°-*:一般使用浓度为0.05%~0.1%,消化时间为37
C、30~180min,主要用于细胞间质抗原的显示。°-*:一般使用浓度为0.1%~0.4%,消化时间为37
*例如:Laminin、CollagenIV
(2) 水浴加热法
*将玻片放入装有抗原修复液的容器中,加热至沸腾,持续10~15分钟。
-优点:操作简单、经济,适用于所有的实验室,
-缺点:对封闭牢固的抗原决定簇暴露不理想。
(3) 微波照射法
*将玻片放入装有抗原修复液的容器中,置微波炉加热至95℃以上,持续l0~15分钟,冷却后,按免疫组化染色步骤进行。
*此方法由于微波场内极性分子、离子高速运动,撞击交联的网链,使抗原异常的构想恢复正常,且因分子运动产热、效率高、时间短,对抗原再现效果好。
(4) 高压加热法暴露抗原
*将玻片浸入抗原修复液内,置高压锅中高压2~3min,可取得*的效果。
*由于高压下受热均匀,特别使用于大批量标本的染色。
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