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1,用一系列稀释液感染大肠杆菌XLl-Blue(OD600=0.5~1.0),并涂布在用于噬菌粒筛 选的适当培养基上,以测定噬菌体文库储液的感染性滴度(infectivity titre)。这个滴 度取决于噬菌体储液的保存代数和状态,可能少于或者等于由测定OD280得到的噬菌体浓度。
2.接种大量来自新鲜LB/tet板[时间少于两周;接种体(inoculum)应该不是单克隆 的]的大肠杆菌XLl-Blue于含有100m1 2 YT/tet培养基的500m1带塞锥形瓶中。37℃200r/min培养至OD600=1.0(5×108cfu/m1,总计5×10lO cfu)。加入5×10l0个感染性噬菌粒,并于37℃200r/min培养20分钟。取出少量菌液在选择性培养基上进行滴定,以测定感染的效率。转移培养基到含有1 L 2YT培养基的4 L带塞锥形瓶中,其中含有适用于噬菌粒筛选的抗生素(例如2YT/carb培养基)和M13K07辅助噬菌体(每毫升1010个噬菌体)。37℃200r/min培养过夜。
3.沉淀和纯化噬菌粒。立即使用得到的噬菌体。
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