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1.通过腹腔注射浓度为1.25%(w/v)的阿佛丁来麻醉小鼠,剂量为每克体重注射15ul的阿佛丁。开始时用*注射300ul。用右手抓住一只小鼠尾部的并提起,使其后腿离地。然后用左手抓住鼠的头和颈的后部,提起并翻转小鼠,暴露其腹部。将其固定,尽可能使小鼠不要扭曲或翻身。用右手注射300ul麻醉剂,其将在1分钟内起效。如果小鼠还未被麻醉,那就再注射100ul增量的麻醉剂,直到小鼠表现出深度麻醉的迹象。麻醉时间应该持续30~60分钟。
2.将鼠尾置于温水中,使其尾部血管扩张。
3.用*向一根鼠尾血管注射200~500ul噬菌体悬液。所选鼠尾血管在尾部一侧,并与皮肤表层非常接近。将针头成斜角插入尾部血管,接着以正压推动注射器活塞,从而注射约20f11的噬菌体悬液。假如血管暂时没有红色血液和填充物,那就要正确地确定血管的位置。通过每次注射20/A1悬液并在每次注射后使血管再填满的方式,缓慢注射剩余噬菌体。
4.让噬菌体zui少循环5分钟。
5.将小鼠背部朝下,直接用剪刀在胸腔下的腹部剪开一个口,可以看到肝脏的下侧。用剪刀的将肝脏移到旁边,同时暴露横隔膜。刺破隔膜并把胸腔的一侧剪碎,然后横过隔膜把相对一侧的胸腔也剪碎。用*夹紧剑状软骨,并打开胸腔暴露整个心脏。剪开心脏和胸骨之间的所有连接组织。考虑到排水,zui后要在胸腔的一侧沿腹背方向切开一个口。当正确进行以上步骤时,所有的程序都应该相对无血。皮肤将会少量地出血,但不应有血液在胸腔内积聚,也不能有任何来自心脏或其他主血管的大出血。
6,用10ml的DMEM或PBS来灌注小鼠。首先将注射器针头插入左心室3—5mm,然后推动活塞。若针头位置已经正确,那么你将看到心脏左侧会失色并轻微膨胀。接着用左手拿剪刀剪开右心房,开始用DMEM或PBS匀速灌注,以保持心脏膨胀并仍然跳动的速率,大约2ml/min。
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