上海金穗生物科技有限公司

构建pⅧ噬菌粒库:扩增与储存

时间:2012-12-17阅读:378
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A.辅助噬菌体感染和pⅧ诱导产生
1.按10:1感染重数加入VSC-M13辅助噬菌体[约1012空斑形成单位(pfu)]到100ml 已转化的细菌中(见实验方案6.3)。于37℃静置孵育30分钟。
2.将上述培养物加入到一个含有500mlSOPamp/glu培养基的三角瓶中。加入0.6 m1*溶液和6ml 20%阿拉伯糖溶液。于37℃振摇培养过夜。
B.收集扩增后的噬菌粒库
1.于4℃ 12000g转速(对于JA-10转子为8000r/min)将上述过夜培养物离心。将上清 转移到一个新的离心管中,并再次离心。
2.将上清转移到另一个新的离心管中,加入0.2倍体积的PEG/NaCl以沉降噬菌体。充分混合后冰上静置1小时。
3.于8000r/min离心15分钟将噬菌体沉降。小心将上清除去,用10ml PBS将噬菌体沉淀重悬。滴定噬菌体储液;滴定结果出来前,噬菌体悬液可在4℃短期保存24小时。若需要长期保存,可将噬菌体悬液以1000倍库当量,于-20℃分批冻存。

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