用可溶性*化抗原进行选择

时间：2012-12-24阅读：651

液相法可以解决直接包被于固相表面的抗原构象可能发生改变的问题。此外，这个方法也使以结合性亲和力使基础的选择更加简单，因为展示多个抗体的噬菌体并无选择优势。液相法也易于控制抗原的浓度，这也有利于选择到有较高亲和力的抗体。为了在液相中进行噬菌体抗体选择，可以使用任何免疫化学试剂公司销售的试剂盒对抗原进行*化。将抗体文库与*化抗原孵育后，用链霉亲和素或亲和素磁珠能够把抗原和其所结合的噬菌体，与未结合的噬菌体抗体分离开来。经适当洗涤后，再用溶液酸或碱溶液洗脱噬菌体抗体。这个方法存在一个问题，就是能识别链霉亲和素的抗体也被分离出来。要避免这个问题，可以在选择前预先削减文库中的链霉亲和素结合抗体；在各轮选择中，交替使用亲和素与链霉亲和素（这两种生物结合蛋白结构上差异甚大，不会发生交叉反应。）；或者用二硫化N—羟基丁二酰亚胺*酯（NHS-SSbiotin）标记抗原并用DTT进行洗脱。