由于RNA聚合酶一般由数个次单元组合而成，早先要在试管内应用RNA聚合酶的转录活性合成RNA并非易事，但这个问题在SP6, T3 及T7 等噬菌体的RNA聚合酶陸续被发现以后，情况已*改观。这主要是因为这类RNA聚合酶由一条多胜肽 （polypeptides） 所构成，其在进行转录反应时所须辨认的启动子长度仅20bp左右，而且转录起始位置非常明确，转录效能良好，成了目前进行胞外转录反应时的*选择。要进行胞外转录反应时，仅需将目标基因次选殖 （subclone）至带有SP6, T3 或T7 启动子的转录载体，或者运用PCR技术在基因的一端加上SP6, T3 或T7 启动子的序列，即可运用对应的RNA聚合酶活性在试管内合成正意股或反意股RNA。 以质体DNA为模版进行胞外转录反应前，应先用限制酶自目标基因的一端切开，以免转录反应持续进行至载体的序列 （run-on），但在选择限制酶切位时应避免使用目标基因也带有的切位；限制酶内切好的质体DNA经phenol/chloroform萃取的后，即可用來进行胞外转录反应。
仪器用具：微量离心机
药品试剂： Plasmid DNA 酵解产物pBlueGus/HindIII 及pBlueGus/BamHI；5×Transcription buffer （200 mM Tris-Cl, pH 8.0; 40 mM MgCl2; 10 mM；spermidine-（HCl）3; 125 mM NaCl; Roche）NTPs （含ATP, CTP, GTP 及UTP 各2.5 mM）；RNase 抑制剂RNasin （40 U/μL）；T7 与T3 RNA polymerase （Roche）　；dH2O/DEPC；100 mM DTT （dithiothreitol）；DNase （RNase-free）
Phenol/chloroform/isoamyl alcohol （25:24:1）, 以下简称PCI；Chloroform/isoamyl alcohol （24:1）, 以下简称CI