当前位置:上海金穗生物科技有限公司>>公司动态>>质体DNA的小?分离法
仪器用具:
微?离心机;冰浴
药品试剂:
MP I (25 mM Tris-HCl, pH 8.0; 10 mM EDTA, pH 8.0; 50 mM glucose)
MP II 新鲜配制 (0.2 N NaOH; 1% SDS; 使用前以10 N NaOH, 10% SDS稀释混合配制)
MP III (3 M *溶液,pH 5.2,置冰浴中)
RNase A (1 mg/mL, 已经过100℃加热30 min 以去除DNase 活性)
纯酒?及70%酒?
TE-8.0 (10 mM Tris-HCl, pH 8.0; 1 mM EDTA, pH 8.0)
方法步骤:
1) pBlueGus/JM109, pQE31/JM109 接种于含100 μg/mL ampicillin 的LB 培养基,于37℃震荡培养过夜。
2) 取1.5 mL 菌液,加于微?离心管中,以6,000 rpm 离心2 min 后,倒去上清,以微?移液器头尽可能吸去残?液体。
◆ 两种质体均请制备三管!
3) 沉淀加入0.1 mL MP I,剧?震荡,将沉淀*打散。
4) 慢慢加入0.2 mL MP II,盖上管盖后将管子反复上下摇动,注意?可震荡! 此时溶液应渐澄清且黏?增加;将离心管置冰浴中。
5) 加入0.15 mL MP III,混合均匀,亦?可剧?震荡,置冰浴中5 min。
6) 以12,000 rpm 离心5 min。
7) 小心吸出上清至另一离心管,加入2 倍体积的纯酒? (或0.6 倍体积的isopropanol),混合均匀,置室温2 min。
8) 以12,000 rpm 离心10 min。倒去上清液,沉淀以70%酒?洗二次,每次各离心1 min。
◆ 小心?要把沉淀也倒掉?!
9) 倒去上清液后,将离心管置回离心机,短暂离心后取出,以微?移液器头尽可能吸去残?液体。将管盖打开,置室温中让沉淀干燥。待沉淀干燥后,以30 μL TE-8.0 溶解 (可以微?移液器头反复缓慢吸放溶液,以助溶解)。
10) 加入1 μL RNase A。
11) 进?限制酶切割、电泳分析等实验。
请输入账号
请输入密码
请输验证码
以上信息由企业自行提供,信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责,环保在线对此不承担任何保证责任。
温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。