动物基因组DNA/RNA提取及含量测定

实验原理
核酸和蛋白质是构成生物有机体的主要成分；核酸是生命的zui基本物质。在生物体中它们结合成核蛋白的形式存在。核酸按其化学组成可以分成两大类，一类含D-2-脱氧核糖的称为脱氧核糖核酸（DNA），主要存在于细胞核中；另一类含D-核糖的称为核糖核酸（RNA),主要存在于细胞质内；由于核酸极不稳定，在较剧烈的化学。物理因素和酶的作用下很易降解，因此在制备时应防止过酸、过碱及其它引起核酸降解的因素作用。在提取中为防止组织中广泛存在的核酸酶降解的作用，应在低温下进行，必要时加入抑制剂，如柠檬酸盐、氟化钠、砷酸盐等，皂土也可抑制DNA酶的活性，如果采用（SDS)或作蛋白质变性剂来分离核酸，它们同时也可以使核酸降解酶破坏，因此常获得较好的效果

一、RNA的提取与测定
由于RNA的种类来源很多，因而提取制备方法各异，一般有法，去污剂法和盐酸胍法，其中法实验室zui常用。组织匀浆后用处理离心，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质，且获得生物活性的RNA。
工业上常用稀碱和浓盐酸法提RNA，用这两种方法提取的核酸均为变性RNA。主要用于制备核苷酸的原料。其工艺较简单，浓盐法是用10％氯化钠的溶液，在90摄氏度提取3—4小时，冷却，离心，上清液乙醇沉淀RNA。稀碱法用0.2％氢氧化钠是酵母裂解，然后酸中和，除蛋白和菌体，上清液乙醇沉淀的RNA ,或调核酸等电点PI2.5沉淀。 
RNA广泛存在啤酒酵母，面包酵母，酒精酵母和各种动物组织中。 
本实验用动物肝脏经组织捣碎，制成组织匀浆，用0.14mol/L氯化钠溶液提取。把细胞之中的核糖核蛋白提取出来，留下含有DNA的细胞核物质，调节PH4.5再将RNA和蛋白质分开，因为在0.14mol/L氯化钠溶液中，RNA－蛋白溶解度大。DNA－蛋白溶解度低，而在1mol/L氯化钠溶液中溶解度zui大。

RNA含量测定
RNA含量的测定方法很多：紫外吸收法、定磷法、常用地衣酚测定其原理是：当RNA与浓盐酸共热时，即可发生降解，形成核糖继而转变成糠醛，后者与3.5－二羟基甲苯（地衣酚）反应，在铁或铜离子催化下，生成鲜绿色复合物，反应在670nm处有zui大吸收峰，RNA浓度在10-100μg/ml范围内，光吸收与RNA浓度成正比，地衣酚特异性差，凡戊糖均有些反应。

试剂和器材
材料：动物肝脏
试剂：
0.14mol/L氯化钠
标准RNA溶液： 100μg/ml
地衣酚试剂(现用现配)
80％溶液
95％乙醇
器材：匀浆器、离心机、分光光度计、烧杯、量筒等

操作方法
RNA提取：
匀浆：称取3克牛肝剪碎，加20ml 0.14mol/L氯化钠溶液10000rn/min左右匀浆1分钟左右
离心：匀浆后溶液离心8000 rn/min离心7分钟，量取上清液毫升数，沉淀物留做提取DNA用
除杂质：加等体积80％酚溶液于上清液中，搅拌充分混合10－20分钟，置冰箱冷却静止30-40分钟，离心取上层水相含有RNA，弃下层酚相含蛋白质和DNA等杂质
沉淀RNA:取上层水相含RNA溶液，加入2倍体积95％冷乙醇，搅拌，充分混合，置冰箱中冷却，至出现白色絮状物－RNA，离心8000 rn/min离心7分钟，取沉淀物
溶解：用少量去离子水（约4毫升）溶解沉淀物，用以测定其含量