真核细胞的转染

　　该操作以Invitrogen 公司的脂质体转染试剂 LipofectAMINE为例,其它转染 试剂可参照各自的使用说明书进行。

1.   在 6 孔板中接种 1-3×105 细胞/ 孔，加入 2ml *培养基，置CO2 孵箱中 37℃

培养过夜。

2.   待细胞长到 50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液：

溶液 A：将 1-2μg待转染的超纯 DNA 稀释到 100μl 无血清培养基中

溶液 B：将 2-25μl  LipofectAMIN E 稀释到 100μl 无血清培养基中

3.   混合溶液 A 和 B，轻轻混匀，室温放置 15-45min。

4.   用 2ml 无血清培养基轻轻洗涤细胞，加入 0.8ml 无血清培养基/孔，将脂质体 复合物滴加到孔中，轻轻摇晃混匀，置 CO2 孵箱中 37℃孵育 2-24hr。

5.   用*培养基替换转染液，继续培养。

6.   24-72hr 后检测蛋白质的表达或传代并加入选择性抗生素以筛选稳定表达株。