大鼠二胺氧化酶elisa试剂盒使用说明书

【资料简介】

大鼠二胺氧化酶elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的大鼠二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠二胺氧化酶(DAO)，再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠二胺氧化酶(DAO)浓度。 
标本要求 
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠二胺氧化酶elisa试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800 IU/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
400 IU/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
200 IU/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
100 IU/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
50 IU/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为大鼠二胺氧化酶elisa试剂盒样品的实际浓度。