组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书

【资料简介】

SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS50556.2 v.A

组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

组织铜离子浓度比色法定量检测试剂是一种旨在通过偶氮生色底物，与还原后的一价铜反应产生蓝色螯合复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中总铜浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体组织裂解悬液样品中总铜的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

铜为人体营养中的必需的微量元素。作为辅因子，含铜酶蛋白在铁和儿茶酚胺（catecholamine）代谢、游离自由基清除、血红蛋白、弹力纤维和胶原蛋白合成等活动中起着重要作用，从而调节体内氧化还原状态铜在肝脏和血浆中以铜蓝蛋白（caeruloplasmin）形式存在，具有铁氧化酶抗氧化活性。铜含量过低，会导致智力迟钝、色素脱失、贫血、张力减退、骨坏血病变化。一旦缺失，将导致心脏病变、骨质疏松、骨关节炎、Menkes综合征、威尔森氏症等。由此，铜含量检测成为威尔森氏症、小细胞低色素性（microcytichypochromic anemia）贫血、骨病等的诊断指标。铜的检测包括化学法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到其它金属元素的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。4-(3,5-溴

基-2-吡啶偶氮基)-5-(N-乙基-N-磺丙基)苯胺（4-(3,5-Bromo-2-pyridylazo) -5-(N-ethyl-N-sulfopropyl)aniline；Di-Br-PAESA）比色法是一种稳定、简便、准确的铜检测技术。在弱酸性条件下，铜从复合物中解离出来；抗坏血酸（还原型）将解离出来的二价铜离子还原成一价铜离子，一价铜离子与显色剂DiBr-PAESA生成蓝色络合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化（波长580nm），来定量测定细胞铜的总浓度。

其反应系统为：

产品内容

清理液（Reagent A） XX 毫升

裂解液（Reagent B） XX 毫升

去干扰液（Reagent C） XX 毫升

缓冲液（Reagent D） XX 毫升

还原液（Reagent E） XX 瓶

显色液（Reagent F） XX 毫升

标准液（Reagent G） XX 微升

产品说明书1 份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保证3 月

2

用户自备

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器

DOUNCE 匀浆器：用于组织匀化

微型台式离心机：用于样品制备

比色皿：用于反应的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

一、样品准备

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500 毫克组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的15 毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入XX 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次

4． 移入到一个液氮冻存管

5． 即刻放进液氮罐过夜

6． 次日从液氮罐里取出，即刻（zui快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组=织冻融）

7． 放进一个15 毫升锥形离心管

8． 加入预冷的XX 微升裂解液（Reagent B）

9． 涡旋震荡5 秒，充分混匀

10．即刻放进预冷的DOUNCE 匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约40 下）

11．转移到预冷的1.5 毫升离心管

12．放进4℃微型台式离心机离心5 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

13．小心移取500 微升上清液到新的预冷的1.5 毫升离心管

14．移取10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）

15．加入XX 微升抗干扰液（Reagent C）

16．涡旋震荡10 秒

17．放进4℃微型台式离心机离心10 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

18．小心移取上清液到新的1.5 毫升离心管

19．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里备用

2． 设定好分光光度仪：波长580nm（570 至590nm 波长），并置零

3． 实验开始前，移取XX 毫升缓冲液（Reagent D）到1 瓶还原液（Reagent E）中，混匀后，标记为反应工作液，置于冰槽里备用，避免光照。

三、比色测定

1． 移取XX 毫升上述配制的反应工作液到新的1 毫升比色皿

2． 加入XX 微升标准液（Reagent E）或待测样品

3． 上下倾倒数次，混匀

4． 37℃室温下孵育5 分钟，避免光照

5． 即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数（OD）

6． 计算样品铜浓度

XX

注意事项

1． 本产品为20 次操作，包括标准液

2． 本产品线性范围为3 至400 微克/分升

3． 操作时，须戴手套

4． 避免使用EDTA 等处理样本

5． 系统操作过程中，标准液测定只需1 次

6． 孵育反应完成后即刻进行比色测定

7． 比色测定后，比色皿须清洗*

8． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

9． 用户可以换算获得：微克/毫克组织或蛋白；微摩尔/毫克组织或蛋白

10．微克/分升换算成微摩尔/升：微克/分升X 0.1573

11．建议用户建立正常参考值

12．本公司提供系列铜生化检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

秉着“信誉*、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

4

单组份订购信息

编号名称规格

GMS50556.2 组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.2A 清理液（Reagent A） 100 毫升

GMS50556.2B 标准液（Reagent B） 50 毫升

GMS50556.2C 去干扰液（Reagent C） 5 毫升

GMS50556.2D 反应液（Reagent D） 20 毫升

GMS50556.2E 标准液（Reagent E） 200 微升

试剂盒订购信息

产品编号名称规格

GMS50556.1 细胞铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.2 组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.3 体液铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.4 食物铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50556.5 环境铜离子浓度比色法定量检测试剂盒20 次

GMS50557.1 细胞铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.2 组织铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.3 体液铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.4 食物铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次

GMS50557.5 环境铜离子浓度荧光定量检测试剂盒20 次