丙二醛（malondialdehyde）含量试剂盒说明书

【资料简介】

丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书For Research Use only
仅供研究用
货号：QYS-23035
微量法 100 管/96 样
丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理：

MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在 532nm 有zui大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定 600nm 下的吸光度，利用 532nm 与 600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。
需自备的仪器和用品：

丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配置：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
注意事项：

临用前注意试剂一是否*溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。

MDA 提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。
丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书测定步骤：

1、吸取 0.3mL 试剂一于 1.5mL 离心管中，再加入 0.1mL 样本, 混匀。
2、95℃水浴中保温 30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心10min。

3、吸取 200μL 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中，测定 532nm 和 600nm 处的吸光度，记为 A532 和 A600，ΔA= A532-A600。
MDA 含量计算： 
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）中 MDA 含量的计算：

MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=25.8×ΔA

2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算
（1）按照蛋白浓度计算

MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=25.8× ΔA ÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按照样品质量计算

MDA 含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)=25.8×ΔA ÷W

(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：

MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.0516×ΔA

V 反总：反应体系总体积， 4×10-4 L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）中 MDA 含量的计算：

MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=51.6×ΔA

2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算（1）按照蛋白浓度计算

MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=51.6×ΔA÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。（2）按照样品质量计算

MDA 含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)=51.6×ΔA÷W

(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：

MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.1032×ΔA

V 反总：反应体系总体积，4×10-4 L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。