免疫组织化学实验中细胞的脱水

【资料简介】

1、细胞脱水概述
组织经固定和水洗后，会有大量的水分留在组织中，而水又不能与苯融合，因此必须在透明前脱去组织中的水分。用某些溶剂将组织中的水分置换出来的过程称为脱水。对于不同的组织应分开脱水，特别是一些易脆的组织（如肝、脾等）应严格掌握脱水时间，防止在*中停留时间过长。对于动物组织，应比人体标本相应缩短脱水时间。脱水应按照从低浓度到高浓度的过程，否则标本直接进入高浓度溶液中极易引起组织的强烈收缩或使组织发生变形，从而影响切片，还会造成免疫组化实验过程中的脱片。
2、脱水剂的种类
（1）、乙醇：zui常用的脱水剂，脱水能力强，并能使组织硬化，与二甲苯能混合。其缺点是在高浓度乙醇，特别是无水乙醇中停留时间长会引起组织收缩、变脆而影响后续的切片。尤其是应用全自动脱水机，因是加压抽真空并加温脱水，在高浓度乙醇中停留时间更不能太长，应经试验摸索出适合自己单位脱水需要的时间，不能盲目从书本上套用脱水时间。脱水时，应从低浓度向高浓度梯度进行。一般是人体组织从?5％乙醇开始，对于小动物、胚胎及柔软的组织可从30％乙醇开始脱水。只有脱水充分，才能在透明剂中透明。若是人工脱水，必须在加盖的容器内进行，尤其是高浓度乙醇很易吸收空气中的水分，阴雨天更应注意。在透明前将组织取出，用滤纸吸干后再透明。
（2）、丙酮：脱水作用比乙醇强，但对组织的收缩也大，毒性强，价格高，因此一般不用于常规组织的脱水，主要用于快速脱水及固定兼脱水。此时应注意个人防护，在带有抽风功能的装置中进行，脱水时间1～3h左右。丙酮还可作为染色后的脱水剂，用于甲基绿—派洛宁显示DNA及RNA。
（3）、正丁醇：为五色液体，微溶于水，在100ml水中只能溶解8．3g，故脱水能力较弱，但能与水、乙醇及石蜡混合，因此经正丁醇脱水的组织可直接浸蜡。它的优点是很少引起组织的收缩及变脆。一般用法为：组织经固定及冲洗后，依次人50％、70％、80％乙醇中脱水，然后人正丁醇，12～24h后浸蜡。使用时也应注意防护。https://www.hbzhan.com/Login/default?Stand_DownLoadOperate
（4）、叔丁醇：异丁醇的一种，可与水、乙醇、二甲苯混合，可以单用或与乙醇混合使用，是一种使用较广的脱水剂，它不会使组织收缩或变硬，不必经过透明而直接浸蜡。电镜上为常用的中间脱水剂。
（5）、环己酮：沸点为140~C，冰点为一40~C，密度与水相似，无毒，可与苯、二甲苯、氯仿等有机溶剂混合，也是石蜡溶剂，可代替纯乙醇脱水后直接浸蜡，组织不会变硬，不需经二甲苯透明。
（6）、松脂醇：组织固定后按常规经各浓度乙醇至95％乙醇中，按下列顺序进行脱水和透明处理：
①、浸入等份95％乙醇和松脂醇的混合液中，待组织块下沉后转入下步处理；
②、95％乙醇1份加松脂醇2份的混合液中浸泡1h；
③、95％乙醇1份加松脂醇3份的混合液中浸泡1h；https://www.hbzhan.com/Login/default?Stand_DownLoadOperate
④、松脂醇I、Ⅱ、Ⅲ中各浸泡1h；⑤松脂醇5份加石蜡1份的混合液中浸泡lh，然后浸蜡包埋。多用于经乙醇或Carnoy液固定的组织。经松脂醇处理的组织收缩较小，发生硬化也少。