放射性免疫分析方法

【资料简介】

放射性免疫分析方法

一、标记物制备

（一）*化抗体按文献Eli方法制备，在双标记IRMA法采用标记纯化的McAbIgG，在竞争法采用标记纯化IgG。

（二）异硫氰酸荧光素（FITC）标记物采用微量透析法。标记的抗体依检测反应模式不同而异。

（三）标记物竞争法检测小分子化合物，标记物为抗原，双标记液相IRMA，标记物为McAb，标记方法按常规氯胺T氧化法。

二、磁性微粒子固相抗体制备

按照检测反应模式的不同，需要制备不同的磁性微粒子固相抗体]，如固相一抗体，固相二抗体。

取直径800～2000nm 磁性微粒子（表面羧基化），用生理盐水洗涤。按1O倍量悬浮于生理盐水中，在缓缓振荡下加入适量抗体IgG ，立即按IgG对偶联剂2O倍（M：M ）的量加入碳化二亚胺（EDC），在室温振荡下反应2h。再补加10倍量的EDC，移至4℃ 反应过夜。次晨，再经生理盐水充分洗涤，直至上清液经紫外分光光度计280nm 测量A 值大于0.02。zui后加含有0.5 BSA，0.1ONa N3的25mmol/L pH 7.4 PBS中，4℃保存。

三、IRMA检测法反应模式

（一）双标记FITC 抗FITC 法

将两株McAb分别标记FITC和I，按经优化的比例混合稀释液作为标记试剂。检测时，将样品和标记试剂各100ttL加至12×75mm管中，充分混合，放37℃水浴中30~60min，生成夹心免疫复合物。加入抗FITC磁性微粒子悬浮液100tLL，室温反应5min，置磁性分离器上。倾去管中上清液，用PBS—T洗液0.5mL洗两次，在自动r计数器上按双对数或四参数方程处理测量数据，即可打印出相关参数和待测样品浓度。

（二）双标记BAS法

该法是将两株McAb分别标记*和I作为标记试剂，以磁性微粒子固相为分离试剂。其余同上法。

（三）磁性固相一抗法

此模式和常规IRMA的实验原理相同，将两株McAb分别标记I和制备磁性微粒子固相。检测时，取待测样品、I—McAb和磁性微粒子McAb悬浮液各100/1L于管中混匀，37℃温育后，即可在磁性分离器进行洗涤分离，去除游离I-McAb，操作虽简便，但主要缺点是每一检测项目要单独制备磁性微粒子固相抗体，既繁琐又不经济。

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