猪生长激素（GH）ELISA试剂盒使用的操作步骤及注意事项

【资料简介】

猪生长激素（GH）ELISA试剂盒使用的操作步骤：

 1.     标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为18μg/L，12μg/L ，6μg/L，3μg/L，1.5μg/L）。

    2.     加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

    3.     温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4.     配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

    5.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

    6.     加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

    7.     温育：操作同3。

    8.     洗涤：操作同5。

    9.     显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

    10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

    11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

猪生长激素（GH）ELISA试剂盒使用的注意事项：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

    2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

    3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

    4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

    5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6． 底物请避光保存。

    7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

    8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9． 本试剂不同批号组分不得混用。

    10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。